应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体
응용Red중조기술구건사배소항성다기인천련표체재체
Construction of a tetracycline resistance multi-gene coexpression vector using Red recombineering
  • 万方数据
    军事医学 군사의학
    BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
    2011年 10期 754-757,799 ,共5页

    何彰华%师明磊%王洋%叶丙雨%黄芬%张彦%范秋声%王东%肖丽霞%张乐之%李德彬%闫兴%赵志虎

    하창화%사명뢰%왕양%협병우%황분%장언%범추성%왕동%초려하%장악지%리덕빈%염흥%조지호

    四环素抗药性%多基因串联表达载体%Red%重组%质粒%红霉素 四環素抗藥性%多基因串聯錶達載體%Red%重組%質粒%紅黴素
    사배소항약성%다기인천련표체재체%Red%중조%질립%홍매소
    目的 构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体.方法 设计同源臂引物,通过重叠延伸 PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a( + )中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a( + )中,并进行共表达鉴定.结果 获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a( + );构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a( + ),且两基因能够在同一载体上协同表达.结论 成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a( + ),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础.
    목적 구건일충사배소항성적다기인천련표체재체.방법 설계동원비인물,통과중첩연신 PCR획취함사배소항성기인적타파서렬,응용pKD46개도적Red중조계통,재DH5α내체환다기인천련표체재체pET-m28a( + )중적항성기인서렬;재이용동미매(isocaudarner)책략,장sfp화accA1량기인천련조합우pET-mt28a( + )중,병진행공표체감정.결과 획득료함사배소항성적중조질립pET-mt28a( + );구건료량기인천련중조질립pET/sfp/accA1-mt28a( + ),차량기인능구재동일재체상협동표체.결론 성공구건료일충사배소항성표체재체pET-mt28a( + ),병가개도다기인적협동표체,위홍매소합성통로재대장간균중적중건전정료기출.
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