CAJ | 학술논문

目的:构建小鼠B7-H4(rnB7-H4)慢病毒表达载体并观察B7-H4蛋白对脾细胞增殖的影响.方法:从BALB/c小鼠肺脏中克隆B7-H4基因,构建表达载体mB7-H4-EGFP,酶切后克隆入慢病毒表达载体pCDH1-MCS1-EF1-Puro中,命名为pCDH1-mB7-H4-EGFP;以包含起始密码和多克隆位点的寡核苷酸取代mB7-H4作为对照载体pCDH1 -Control-EGFP.分别与包装载体混合物一起经LipofectamineTM 2000转染入293T细胞包装成病毒颗粒,感染293T细胞.pCDH1-mB7-H4-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞分别与BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶ C57BL/6( 1∶1)小鼠脾细胞混合培养,用MTT法检测其对脾细胞增殖的影响,对照为pCDH1-Control-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞进行的相同处理.结果:mB7-H4被成功克隆,测序证实与GenBank的mRNA核酸序列2个核苷酸有差异,但与其编码的氨基酸一致.pCDH1-mB7-H4-EGFP慢病毒表达载体被成功构建.mB7-H4蛋白表达在293T细胞表面,与对照相比,对BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)小鼠脾细胞增殖均具有明显抑制作用.结论:成功构建小鼠B7-H4慢病毒表达载体,感染293T细胞后表达出对脾细胞增殖具有抑制活性的mB7-H4膜表面蛋白.
목적:구건소서B7-H4(rnB7-H4)만병독표체재체병관찰B7-H4단백대비세포증식적영향.방법:종BALB/c소서폐장중극륭B7-H4기인,구건표체재체mB7-H4-EGFP,매절후극륭입만병독표체재체pCDH1-MCS1-EF1-Puro중,명명위pCDH1-mB7-H4-EGFP;이포함기시밀마화다극륭위점적과핵감산취대mB7-H4작위대조재체pCDH1 -Control-EGFP.분별여포장재체혼합물일기경LipofectamineTM 2000전염입293T세포포장성병독과립,감염293T세포.pCDH1-mB7-H4-EGFP중조만병독감염적293T세포분별여BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶ C57BL/6( 1∶1)소서비세포혼합배양,용MTT법검측기대비세포증식적영향,대조위pCDH1-Control-EGFP중조만병독감염적293T세포진행적상동처리.결과:mB7-H4피성공극륭,측서증실여GenBank적mRNA핵산서렬2개핵감산유차이,단여기편마적안기산일치.pCDH1-mB7-H4-EGFP만병독표체재체피성공구건.mB7-H4단백표체재293T세포표면,여대조상비,대BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)소서비세포증식균구유명현억제작용.결론:성공구건소서B7-H4만병독표체재체,감염293T세포후표체출대비세포증식구유억제활성적mB7-H4막표면단백.