中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2002年
4期
427-432
,共6页
许雪梅%张明策%罗利群%刘小娟%朱明昭%司静懿%郭秀婵%宋国兴
許雪梅%張明策%囉利群%劉小娟%硃明昭%司靜懿%郭秀嬋%宋國興
허설매%장명책%라리군%류소연%주명소%사정의%곽수선%송국흥
人乳头瘤病毒16型%E6基因%E7基因%DNA疫苗%细胞毒性T淋巴细胞%抗体
人乳頭瘤病毒16型%E6基因%E7基因%DNA疫苗%細胞毒性T淋巴細胞%抗體
인유두류병독16형%E6기인%E7기인%DNA역묘%세포독성T림파세포%항체
目的利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6E7基因, 研制HPV16 DNA疫苗. 方法定点突变E6的终止密码,并保证E7读码框架不变;定点突变E7蛋白的Rb结合区中对其转化活性维持起关键作用的第24位氨基酸.突变修饰后的基因命名为fmE6E7.PCR扩增fmE6E7,重组入pLNCX载体,脂质体法转染3T3细胞,免疫荧光组织化学及Western blot检测转染细胞蛋白的表达.经软琼脂集落培养法和BALB/c裸鼠皮下接种法检测fmE6E7的转化活性.然后PCR扩增fmE6E7,构建pVR1012-fmE6E7真核表达质粒,于C57BL/6小鼠肌肉内直接进行裸DNA免疫,51Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体. 结果测序证实获得了预期的突变结果.pLNCX-fmE6E7转染细胞体外软琼脂培养3周未见集落形成;裸鼠皮下接种2月后未见移植瘤形成(0/3).免疫鼠获得了较好的E7特异性的抗体E和抗原特异性的CTL. 结论修饰后E6E7基因可融合表达,转化活性消除的同时还可诱发特异的细胞免疫和体液免疫,表明中国山东地方株的E6E7基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因.
目的利用突變脩飾後消除轉化活性併保留抗原性的中國山東地方株人乳頭瘤病毒16型(HPV16)E6E7基因, 研製HPV16 DNA疫苗. 方法定點突變E6的終止密碼,併保證E7讀碼框架不變;定點突變E7蛋白的Rb結閤區中對其轉化活性維持起關鍵作用的第24位氨基痠.突變脩飾後的基因命名為fmE6E7.PCR擴增fmE6E7,重組入pLNCX載體,脂質體法轉染3T3細胞,免疫熒光組織化學及Western blot檢測轉染細胞蛋白的錶達.經軟瓊脂集落培養法和BALB/c裸鼠皮下接種法檢測fmE6E7的轉化活性.然後PCR擴增fmE6E7,構建pVR1012-fmE6E7真覈錶達質粒,于C57BL/6小鼠肌肉內直接進行裸DNA免疫,51Cr釋放法體外分析免疫鼠的細胞毒性T淋巴細胞活性,間接ELISA法檢測免疫鼠血清中E7特異性抗體. 結果測序證實穫得瞭預期的突變結果.pLNCX-fmE6E7轉染細胞體外軟瓊脂培養3週未見集落形成;裸鼠皮下接種2月後未見移植瘤形成(0/3).免疫鼠穫得瞭較好的E7特異性的抗體E和抗原特異性的CTL. 結論脩飾後E6E7基因可融閤錶達,轉化活性消除的同時還可誘髮特異的細胞免疫和體液免疫,錶明中國山東地方株的E6E7基因可作為HPV16治療性DNA疫苗的靶基因.
목적이용돌변수식후소제전화활성병보류항원성적중국산동지방주인유두류병독16형(HPV16)E6E7기인, 연제HPV16 DNA역묘. 방법정점돌변E6적종지밀마,병보증E7독마광가불변;정점돌변E7단백적Rb결합구중대기전화활성유지기관건작용적제24위안기산.돌변수식후적기인명명위fmE6E7.PCR확증fmE6E7,중조입pLNCX재체,지질체법전염3T3세포,면역형광조직화학급Western blot검측전염세포단백적표체.경연경지집락배양법화BALB/c라서피하접충법검측fmE6E7적전화활성.연후PCR확증fmE6E7,구건pVR1012-fmE6E7진핵표체질립,우C57BL/6소서기육내직접진행라DNA면역,51Cr석방법체외분석면역서적세포독성T림파세포활성,간접ELISA법검측면역서혈청중E7특이성항체. 결과측서증실획득료예기적돌변결과.pLNCX-fmE6E7전염세포체외연경지배양3주미견집락형성;라서피하접충2월후미견이식류형성(0/3).면역서획득료교호적E7특이성적항체E화항원특이성적CTL. 결론수식후E6E7기인가융합표체,전화활성소제적동시환가유발특이적세포면역화체액면역,표명중국산동지방주적E6E7기인가작위HPV16치료성DNA역묘적파기인.
