中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
6期
57-60
,共4页
孙磊磊%程艺%梁梓森%周慧英%琚春梅
孫磊磊%程藝%樑梓森%週慧英%琚春梅
손뢰뢰%정예%량재삼%주혜영%거춘매
伪狂犬病毒%EP0基因%克隆%表达
偽狂犬病毒%EP0基因%剋隆%錶達
위광견병독%EP0기인%극륭%표체
为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0.经测序鉴定正确后,用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0.将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDSPAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性.结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227 bp;重组表达质粒pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75 ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应.
為瞭研究EP0蛋白在偽狂犬病毒粒子中的定位及其功能,試驗利用PCR從偽狂犬病毒基因組中擴增PRV EP0基因的編碼區,剋隆至pMD18-T載體,構建重組質粒pMD-EP0.經測序鑒定正確後,用EcoR Ⅰ和HindⅢ雙酶切pMD-EP0,迴收EP0基因與經同樣雙酶切處理的pET-32a(+)進行連接,構建重組質粒pET-EP0.將pET-EP0轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導後,通過SDSPAGE和Western blotting檢測融閤蛋白的錶達情況及反應原性.結果錶明,成功擴增得到EP0基因編碼區序列,大小為1227 bp;重組錶達質粒pET-EP0經誘導後,EP0融閤蛋白穫得瞭錶達,大小約為75 ku,主要以包涵體形式存在,且能與偽狂犬病毒暘性血清反應.
위료연구EP0단백재위광견병독입자중적정위급기공능,시험이용PCR종위광견병독기인조중확증PRV EP0기인적편마구,극륭지pMD18-T재체,구건중조질립pMD-EP0.경측서감정정학후,용EcoR Ⅰ화HindⅢ쌍매절pMD-EP0,회수EP0기인여경동양쌍매절처리적pET-32a(+)진행련접,구건중조질립pET-EP0.장pET-EP0전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도후,통과SDSPAGE화Western blotting검측융합단백적표체정황급반응원성.결과표명,성공확증득도EP0기인편마구서렬,대소위1227 bp;중조표체질립pET-EP0경유도후,EP0융합단백획득료표체,대소약위75 ku,주요이포함체형식존재,차능여위광견병독양성혈청반응.
