CAJ | 학술논문

目的建立心脏特异表达(p)RR的转基因小鼠,研究(p)RR在心肌病发病过程中的调节作用.方法将(p) RR基因插入到心脏特异表达启动子α-MHC下游,构建转基因表达载体,通过显微注射的方法建立(p)RR转基因小鼠,PCR法鉴定转基因小鼠的基因型:Western blot和免疫组化的方法检测(p)RR在心脏组织中的表达；利用小动物超声仪检测转基因小鼠的心脏结构和功能；双色免疫荧光共聚焦进行(p)RR蛋白在转基因小鼠中的亚细胞定位,Western blot方法检测了钙泵(ATP2A2)、钠-钙交换体1(NCX 1)以及肌钙蛋白T(cTnT)在转基因小鼠心脏组织中表达量的变化情况.结果建立了心脏高表达(p)RR的转基因小鼠品系；内源性和转基因高表达的(p)RR蛋白均定位在细胞内高尔基体和内质网上；心脏特异高表达(p)RR蛋白使小鼠心脏收缩功能增强,主要表现在与同窝阴性对照小鼠相比,转基因小鼠收缩期左室内径( LVID,systolic)降低9％ (P＜0.05,n=18),收缩期容积( LVESV,systolic)减少了23％ (P ＜0.05,n=18),射血分数EF( ejection fraction)升高14％ (P＜0.01,n=18),短轴缩短率FS( fraction shortening)升高20％ (P ＜0.01,n=18)；和心脏收缩功能和钙离子相关的ATP2A2和NCX 1表达均下调,而cTnT表达量上调.结论在心脏中过表达(p)RR能够引起心脏收缩功能明显增强,同时直接或间接调节ATP2A2、NCX 1和cTnT表达.提示(p)RR可能是调节心脏中的钙离子而参与影响心肌功能.
목적 건립심장특이표체(p)RR적전기인소서,연구(p)RR재심기병발병과정중적조절작용.방법 장(p) RR기인삽입도심장특이표체계동자α-MHC하유,구건전기인표체재체,통과현미주사적방법건립(p)RR전기인소서,PCR법감정전기인소서적기인형:Western blot화면역조화적방법검측(p)RR재심장조직중적표체；이용소동물초성의검측전기인소서적심장결구화공능；쌍색면역형광공취초진행(p)RR단백재전기인소서중적아세포정위,Western blot방법검측료개빙(ATP2A2)、납-개교환체1(NCX 1)이급기개단백T(cTnT)재전기인소서심장조직중표체량적변화정황.결과 건립료심장고표체(p)RR적전기인소서품계；내원성화전기인고표체적(p)RR단백균정위재세포내고이기체화내질망상；심장특이고표체(p)RR단백사소서심장수축공능증강,주요표현재여동와음성대조소서상비,전기인소서수축기좌실내경( LVID,systolic)강저9％ (P＜0.05,n=18),수축기용적( LVESV,systolic)감소료23％ (P ＜0.05,n=18),사혈분수EF( ejection fraction)승고14％ (P＜0.01,n=18),단축축단솔FS( fraction shortening)승고20％ (P ＜0.01,n=18)；화심장수축공능화개리자상관적ATP2A2화NCX 1표체균하조,이cTnT표체량상조.결론 재심장중과표체(p)RR능구인기심장수축공능명현증강,동시직접혹간접조절ATP2A2、NCX 1화cTnT표체.제시(p)RR가능시조절심장중적개리자이삼여영향심기공능.