CAJ | 학술논문

目的：本研究采用的rhEPO-Fc融合蛋白是首次将编码人IgG Fc段的基因与编码人EPO的基因片段连接,并将其克隆至高表达质粒载体中,用该质粒转染CHO细胞进行分泌表达所得。通过对rhEPO-Fc融合蛋白的质量检验和实验方法参数的选择,建立rhEPO-Fc融合蛋白的质量标准。方法：采用细胞MTT比色法及Human EPO ELISA试剂盒测定rhEPO-Fc的体外生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相色谱法（HPLC）测定纯度,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛（DIG）标记的核酸探针法测定外源性DNA残留量,等电聚焦电泳法测定等电点,间苯二酚显色法测定唾液酸（SA）含量。结果：rhEPO-Fc的比活性为1.1×105IU/mg蛋白,蛋白含量为1.58mg/ml,相对分子质量约为59000道尔顿,纯度超过99.0%,紫外最大吸收峰约在280nm波长处,外源性DNA残留量小于10pg/mg,等电点为4.5～6.5,唾液酸含量为11.92mol/mol蛋白质。结论：所建立的质控方法已用于rhEPO-Fc制品的检定,可以有效地控制rhEPO-Fc制品的质量。
목적：본연구채용적rhEPO-Fc융합단백시수차장편마인IgG Fc단적기인여편마인EPO적기인편단련접,병장기극륭지고표체질립재체중,용해질립전염CHO세포진행분비표체소득。통과대rhEPO-Fc융합단백적질량검험화실험방법삼수적선택,건립rhEPO-Fc융합단백적질량표준。방법：채용세포MTT비색법급Human EPO ELISA시제합측정rhEPO-Fc적체외생물학활성,Lowry법측정단백함량,SDS-취병희선알응효전영법측정상대분자질량,고효액상색보법（HPLC）측정순도,자외분광광도법측정자외흡수광보,지고신（DIG）표기적핵산탐침법측정외원성DNA잔류량,등전취초전영법측정등전점,간분이분현색법측정타액산（SA）함량。결과：rhEPO-Fc적비활성위1.1×105IU/mg단백,단백함량위1.58mg/ml,상대분자질량약위59000도이돈,순도초과99.0%,자외최대흡수봉약재280nm파장처,외원성DNA잔류량소우10pg/mg,등전점위4.5～6.5,타액산함량위11.92mol/mol단백질。결론：소건립적질공방법이용우rhEPO-Fc제품적검정,가이유효지공제rhEPO-Fc제품적질량。