CAJ | 학술논문

目的:研究外源性microRNA-101前体的真核表达载体构建方法和其在人胎盘绒毛癌细胞JAR中的表达,及其对靶基因EZH2的沉默作用.方法 :利用化学合成法合成microRNA-101前体分子(pre-microRNA-101)并克隆至真核表达载体pRNAT-CMV3.2/Neo.通过酶切及测序法验证该阳性重组质粒pRNAT-CMV3.2-mir101的正确性.体外培养人胎盘绒毛癌细胞JAR;利用脂质体转染法将空白质粒及重组子pRNAT-CMV3.2-mir101转染至JAR细胞.应用Northern blotting检测各组细胞之间成熟microRNA-101(mature microRNA-101)的表达情况;应用Western blotting检测各组细胞中JAR的表达情况.结果: 质粒酶切及测序结果显示pRNAT-CMV3.2-mir101上的microRNA-101与合成的pre-microRNA-101寡核苷酸序列完全一致,无碱基的突变和缺失.Northern blotting结果显示,pRNAT-CMV3.2-mir101转染组细胞的总RNA中含有microRNA-101阳性条带,说明该细胞中mature microRNA-101呈高水平表达.Western blotting结果表明,pRNAT-CMV3.2-mir101转染组JAR细胞中的EZH2蛋白表达量(52.76±3.12)%低于对照组(81.18±2.96)%,两者具有显著差异(P<0.05).结论: 通过构建真核细胞表达质粒可以高效表达外源性microRNA分子;microRNA-101可以有效地沉默宿主细胞JAR中靶基因EZH2的表达.
목적:연구외원성microRNA-101전체적진핵표체재체구건방법화기재인태반융모암세포JAR중적표체,급기대파기인EZH2적침묵작용.방법 :이용화학합성법합성microRNA-101전체분자(pre-microRNA-101)병극륭지진핵표체재체pRNAT-CMV3.2/Neo.통과매절급측서법험증해양성중조질립pRNAT-CMV3.2-mir101적정학성.체외배양인태반융모암세포JAR;이용지질체전염법장공백질립급중조자pRNAT-CMV3.2-mir101전염지JAR세포.응용Northern blotting검측각조세포지간성숙microRNA-101(mature microRNA-101)적표체정황;응용Western blotting검측각조세포중JAR적표체정황.결과: 질립매절급측서결과현시pRNAT-CMV3.2-mir101상적microRNA-101여합성적pre-microRNA-101과핵감산서렬완전일치,무감기적돌변화결실.Northern blotting결과현시,pRNAT-CMV3.2-mir101전염조세포적총RNA중함유microRNA-101양성조대,설명해세포중mature microRNA-101정고수평표체.Western blotting결과표명,pRNAT-CMV3.2-mir101전염조JAR세포중적EZH2단백표체량(52.76±3.12)%저우대조조(81.18±2.96)%,량자구유현저차이(P<0.05).결론: 통과구건진핵세포표체질립가이고효표체외원성microRNA분자;microRNA-101가이유효지침묵숙주세포JAR중파기인EZH2적표체.