CAJ | 학술논문

目的:探索骨髓间充质干细胞(BMSCS)体外定向分化成视网膜色素上皮(RPE)样细胞所需的微环境.方法:采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化BMSCS,第一阶段将培养第3代的细胞以bFGF、EGF及BDNF三种因子首先进行向神经前体细胞诱导分化,应用免疫细胞化学检测诱导细胞巢蛋白表达情况,当巢蛋白阳性表达率达到最高时去除诱导因子,进行第二阶段与第三代人RPE细胞共培养诱导2w,两阶段诱导后均采用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测角蛋白及RPE65蛋白表达情况.结果:免疫细胞化学检测方面,诱导第3d开始能检测到巢蛋白表达,第12d阳性表达率达到最高,达(86.9±2.6)%,第一阶段诱导后见角蛋白表达,未见RPE65蛋白表达,第二阶段诱导后见角蛋白表达,阳性率为(60.8±3.1)%,见RPE65蛋白表达,阳性率为(25.7±3.8)%.RT-PCR检测方面,两阶段角蛋白与RPE65蛋白结果与免疫细胞化学检测结果一致.结论:体外采用分阶段诱导法,应用因子bFGF、EGF、BDNF及与RPE细胞共培养的微环境作用下能在体外诱导BMSCS表达RPE细胞标志物角蛋白以及RPE65蛋白.
목적:탐색골수간충질간세포(BMSCS)체외정향분화성시망막색소상피(RPE)양세포소수적미배경.방법:채용림파세포분리액제도리심법분리순화BMSCS,제일계단장배양제3대적세포이bFGF、EGF급BDNF삼충인자수선진행향신경전체세포유도분화,응용면역세포화학검측유도세포소단백표체정황,당소단백양성표체솔체도최고시거제유도인자,진행제이계단여제삼대인RPE세포공배양유도2w,량계단유도후균채용면역세포화학급RT-PCR방법검측각단백급RPE65단백표체정황.결과:면역세포화학검측방면,유도제3d개시능검측도소단백표체,제12d양성표체솔체도최고,체(86.9±2.6)%,제일계단유도후견각단백표체,미견RPE65단백표체,제이계단유도후견각단백표체,양성솔위(60.8±3.1)%,견RPE65단백표체,양성솔위(25.7±3.8)%.RT-PCR검측방면,량계단각단백여RPE65단백결과여면역세포화학검측결과일치.결론:체외채용분계단유도법,응용인자bFGF、EGF、BDNF급여RPE세포공배양적미배경작용하능재체외유도BMSCS표체RPE세포표지물각단백이급RPE65단백.