动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2010年
6期
5-10
,共6页
楚秋霞%徐照学%施巧婷%陆涛峰%张彦明
楚鞦霞%徐照學%施巧婷%陸濤峰%張彥明
초추하%서조학%시교정%륙도봉%장언명
南阳牛%BoLA-DRA%pGEX-4T-1%原核表达
南暘牛%BoLA-DRA%pGEX-4T-1%原覈錶達
남양우%BoLA-DRA%pGEX-4T-1%원핵표체
为克隆南阳牛BoLA-DRA基因,构建原核表达载体并研究该基因在大肠埃希菌中的表达.从南阳牛脾脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到BoLA-DRA基因,将其克隆至pGEM-T easy克隆载体上,转化感受态细胞DH 5a,经测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建出重组表达质粒,经IPTG诱导表达.结果表明,本试验成功克隆了大小为917 bp的BoLA-DRA基因,重组质粒pGEX-4T-DRA在大肠埃希菌中以包涵体形式表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定大小为54.4 ku,与预期结果一致.为进一步研究该蛋白的功能及制备抗体奠定了基础.
為剋隆南暘牛BoLA-DRA基因,構建原覈錶達載體併研究該基因在大腸埃希菌中的錶達.從南暘牛脾髒組織中提取總RNA,利用RT-PCR方法擴增得到BoLA-DRA基因,將其剋隆至pGEM-T easy剋隆載體上,轉化感受態細胞DH 5a,經測序鑒定後,進一步亞剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-1中,構建齣重組錶達質粒,經IPTG誘導錶達.結果錶明,本試驗成功剋隆瞭大小為917 bp的BoLA-DRA基因,重組質粒pGEX-4T-DRA在大腸埃希菌中以包涵體形式錶達,錶達產物經SDS-PAGE和Western blot鑒定大小為54.4 ku,與預期結果一緻.為進一步研究該蛋白的功能及製備抗體奠定瞭基礎.
위극륭남양우BoLA-DRA기인,구건원핵표체재체병연구해기인재대장애희균중적표체.종남양우비장조직중제취총RNA,이용RT-PCR방법확증득도BoLA-DRA기인,장기극륭지pGEM-T easy극륭재체상,전화감수태세포DH 5a,경측서감정후,진일보아극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1중,구건출중조표체질립,경IPTG유도표체.결과표명,본시험성공극륭료대소위917 bp적BoLA-DRA기인,중조질립pGEX-4T-DRA재대장애희균중이포함체형식표체,표체산물경SDS-PAGE화Western blot감정대소위54.4 ku,여예기결과일치.위진일보연구해단백적공능급제비항체전정료기출.
