中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2008年
12期
88-91
,共4页
刘涛%陈赛娟%曹洪战%刘子伟%朱子杰%苏霞%孙继国
劉濤%陳賽娟%曹洪戰%劉子偉%硃子傑%囌霞%孫繼國
류도%진새연%조홍전%류자위%주자걸%소하%손계국
猪繁殖与呼吸综合征病毒%河北分离株%ORF5基因%原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%河北分離株%ORF5基因%原覈錶達
저번식여호흡종합정병독%하북분리주%ORF5기인%원핵표체
从河北沧州分离到1株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经过4代盲传后,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为HB-3(cz)株.根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株ORF5基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物(P1/P2),用RT-PCR方法扩增完整ORF5基因,将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌,阳性重组质粒进行序列测定与分析.再设计另一对引物(P3/P4)从重组载体pGM-ORF5中扩增出缺失了N 端28个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,并成功获得表达,经Western-blotting分析表明,表达蛋白与阳性血清发生特异性反应.为研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂奠定了基础.
從河北滄州分離到1株疑似豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒,接種Marc-145細胞,經過4代盲傳後,齣現細胞病變,經鑒定為PRRSV,命名為HB-3(cz)株.根據GenBank公佈的PRRSV CH-1a株ORF5基因的覈苷痠序列,設計閤成一對特異性引物(P1/P2),用RT-PCR方法擴增完整ORF5基因,將擴增產物連接到pGM-T載體併轉化剋隆菌,暘性重組質粒進行序列測定與分析.再設計另一對引物(P3/P4)從重組載體pGM-ORF5中擴增齣缺失瞭N 耑28箇氨基痠殘基的tGP5的編碼序列tORF5,剋隆入原覈錶達載體pGEX-6P-1,併成功穫得錶達,經Western-blotting分析錶明,錶達蛋白與暘性血清髮生特異性反應.為研製PRRSV新型疫苗及診斷試劑奠定瞭基礎.
종하북창주분리도1주의사저번식여호흡종합정병독,접충Marc-145세포,경과4대맹전후,출현세포병변,경감정위PRRSV,명명위HB-3(cz)주.근거GenBank공포적PRRSV CH-1a주ORF5기인적핵감산서렬,설계합성일대특이성인물(P1/P2),용RT-PCR방법확증완정ORF5기인,장확증산물련접도pGM-T재체병전화극륭균,양성중조질립진행서렬측정여분석.재설계령일대인물(P3/P4)종중조재체pGM-ORF5중확증출결실료N 단28개안기산잔기적tGP5적편마서렬tORF5,극륭입원핵표체재체pGEX-6P-1,병성공획득표체,경Western-blotting분석표명,표체단백여양성혈청발생특이성반응.위연제PRRSV신형역묘급진단시제전정료기출.
