CAJ | 학술논문

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,方法体外培养细粒棘球蚴原头节,实验分为2组,即RPMI 1640组及RPMI 1640添加谷氨酰胺组,分别用不同浓度的H2O2诱导,使其发生细胞凋亡.用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测凋亡细胞;用过氧化物酶标记链酶卵白素(SP)染色-免疫组化法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)以及FAS基凶蛋白(跨膜蛋白Fas)表达情况.表达产物用二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木素复染.TUNEL反应以细胞核黄染者为阳性细胞,caspase-1和caspase-3以细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,Fas 以细胞膜和细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,无黄染者为阴性细胞.根据每个原头节中阳性细胞数所占百分比,对原头节阳性表达程度分为4个级别,即原头节中阳性细胞数＜5%为"-",5%～25%为"+",26%～50%为"++".＞50%为"+++".实验重复2次.各组均设空白对照组.结果 RPMI 1640 组,1 mmol/L H2O2诱导12 h,查见典型的TUNEL反应阳性细胞；诱导4 h,caspase-1表达86.6%为"+～++",cas pase-3表达77.8%为"+～++"；诱导8 h,caspaae-1表达86.6%为"+～++'',caspase-3表达80.0%为"+～++".均比对照组明显增加(P＜0.05).而5 mmol/L H2O2诱导4 h,caspase-1表达93.0%为"++～+++",caspase-3表达89.5%为"+～++"；诱导8 h,caspase-1表达"++～+++"降为53.2%,caspase-3表达"+～++"降为48.4%且阴性表达为46.8%,降低显著(P＜0.01).添加谷氨酰胺(终浓度为2mmol/L)组,5mmol/L H2O2诱导8 h,caspase-3 100%为"++～+++"高度阳性表达.与平行的RPMI 1640组(caspase-3表达"++～+++"为32.2%,且阴性表达为46.8%)相比,变化明显.原头节在对照组和诱导组均可见Fas阳性表达细胞,RPMI 1640组5 mmol/L H2O2诱导4 h,"+～++"表达为 53.0%,对照组为20.0%；RPMI 1640添加谷氨酰胺组5 mmol/L H2O2诱导8 h,"+～++"表达为88.7%,对照组为71.4%,诱导后均有所增加(P＜0.05). 结论 H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡. 目的探討過氧化氫(H2O2)體外誘導細粒棘毬蚴原頭節細胞凋亡,方法體外培養細粒棘毬蚴原頭節,實驗分為2組,即RPMI 1640組及RPMI 1640添加穀氨酰胺組,分彆用不同濃度的H2O2誘導,使其髮生細胞凋亡.用原位末耑脫氧覈糖覈苷痠轉移酶標記技術(TUNEL法)檢測凋亡細胞;用過氧化物酶標記鏈酶卵白素(SP)染色-免疫組化法檢測半胱天鼕氨痠蛋白酶-1(caspase-1)、半胱天鼕氨痠蛋白酶-3(caspase-3)以及FAS基兇蛋白(跨膜蛋白Fas)錶達情況.錶達產物用二氨基聯苯胺(DAB)顯色,囌木素複染.TUNEL反應以細胞覈黃染者為暘性細胞,caspase-1和caspase-3以細胞漿被染成棕黃色為暘性細胞,Fas 以細胞膜和細胞漿被染成棕黃色為暘性細胞,無黃染者為陰性細胞.根據每箇原頭節中暘性細胞數所佔百分比,對原頭節暘性錶達程度分為4箇級彆,即原頭節中暘性細胞數＜5%為"-",5%～25%為"+",26%～50%為"++".＞50%為"+++".實驗重複2次.各組均設空白對照組.結果 RPMI 1640 組,1 mmol/L H2O2誘導12 h,查見典型的TUNEL反應暘性細胞；誘導4 h,caspase-1錶達86.6%為"+～++",cas pase-3錶達77.8%為"+～++"；誘導8 h,caspaae-1錶達86.6%為"+～++'',caspase-3錶達80.0%為"+～++".均比對照組明顯增加(P＜0.05).而5 mmol/L H2O2誘導4 h,caspase-1錶達93.0%為"++～+++",caspase-3錶達89.5%為"+～++"；誘導8 h,caspase-1錶達"++～+++"降為53.2%,caspase-3錶達"+～++"降為48.4%且陰性錶達為46.8%,降低顯著(P＜0.01).添加穀氨酰胺(終濃度為2mmol/L)組,5mmol/L H2O2誘導8 h,caspase-3 100%為"++～+++"高度暘性錶達.與平行的RPMI 1640組(caspase-3錶達"++～+++"為32.2%,且陰性錶達為46.8%)相比,變化明顯.原頭節在對照組和誘導組均可見Fas暘性錶達細胞,RPMI 1640組5 mmol/L H2O2誘導4 h,"+～++"錶達為 53.0%,對照組為20.0%；RPMI 1640添加穀氨酰胺組5 mmol/L H2O2誘導8 h,"+～++"錶達為88.7%,對照組為71.4%,誘導後均有所增加(P＜0.05). 結論 H2O2可誘導細粒棘毬蚴原頭節細胞凋亡.
목적 탐토과양화경(H2O2)체외유도세립극구유원두절세포조망,방법 체외배양세립극구유원두절,실험분위2조,즉RPMI 1640조급RPMI 1640첨가곡안선알조,분별용불동농도적H2O2유도,사기발생세포조망.용원위말단탈양핵당핵감산전이매표기기술(TUNEL법)검측조망세포;용과양화물매표기련매란백소(SP)염색-면역조화법검측반광천동안산단백매-1(caspase-1)、반광천동안산단백매-3(caspase-3)이급FAS기흉단백(과막단백Fas)표체정황.표체산물용이안기련분알(DAB)현색,소목소복염.TUNEL반응이세포핵황염자위양성세포,caspase-1화caspase-3이세포장피염성종황색위양성세포,Fas 이세포막화세포장피염성종황색위양성세포,무황염자위음성세포.근거매개원두절중양성세포수소점백분비,대원두절양성표체정도분위4개급별,즉원두절중양성세포수＜5%위"-",5%～25%위"+",26%～50%위"++".＞50%위"+++".실험중복2차.각조균설공백대조조.결과 RPMI 1640 조,1 mmol/L H2O2유도12 h,사견전형적TUNEL반응양성세포；유도4 h,caspase-1표체86.6%위"+～++",cas pase-3표체77.8%위"+～++"；유도8 h,caspaae-1표체86.6%위"+～++'',caspase-3표체80.0%위"+～++".균비대조조명현증가(P＜0.05).이5 mmol/L H2O2유도4 h,caspase-1표체93.0%위"++～+++",caspase-3표체89.5%위"+～++"；유도8 h,caspase-1표체"++～+++"강위53.2%,caspase-3표체"+～++"강위48.4%차음성표체위46.8%,강저현저(P＜0.01).첨가곡안선알(종농도위2mmol/L)조,5mmol/L H2O2유도8 h,caspase-3 100%위"++～+++"고도양성표체.여평행적RPMI 1640조(caspase-3표체"++～+++"위32.2%,차음성표체위46.8%)상비,변화명현.원두절재대조조화유도조균가견Fas양성표체세포,RPMI 1640조5 mmol/L H2O2유도4 h,"+～++"표체위 53.0%,대조조위20.0%；RPMI 1640첨가곡안선알조5 mmol/L H2O2유도8 h,"+～++"표체위88.7%,대조조위71.4%,유도후균유소증가(P＜0.05). 결론 H2O2가유도세립극구유원두절세포조망.