遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2008年
8期
1069-1074
,共6页
绿色荧光蛋白基因%表达载体%构建%转基因%不定根
綠色熒光蛋白基因%錶達載體%構建%轉基因%不定根
록색형광단백기인%표체재체%구건%전기인%불정근
利用pBIN19、pGFP和pCHS质粒,成功构建了CaMV 35S启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达载体pBIN-35S-GFP,并导入野生型发根农杆菌K599.矮牵牛的转化实验表明,矮牵牛离体叶片被发根农杆菌K599(带pBIN-35S-GFP质粒)感染生根率达45%.对诱导的不定根基因组DNA的PCR检测表明,不定根基因组中含有发根农杆菌K599 Ri质粒中的rolB基因和外源gfp基因;转基因不定根在蓝色光激发下能发出强烈的绿色荧光,表明构建的转基因载体pBIN-35S-GFP能实现gfp基因的高效表达.该载体在CaMV 35S启动子的两端各有一个多克隆位点,可以方便地进行启动子替换,用于研究不同启动子的功能.此外,该载体在gfp基因的5'端含有多克隆位点,在3'端含有EcoR I和Bsm I两个单一酶切位点,可以方便地在5'端连接上目标基因,表达含GFP的融合蛋白,进行目标基因编码蛋白的亚细胞定位;也可以方便地切除gfp基因,连上需要的目的基因进行转化.
利用pBIN19、pGFP和pCHS質粒,成功構建瞭CaMV 35S啟動子驅動的gfp基因的植物轉基因錶達載體pBIN-35S-GFP,併導入野生型髮根農桿菌K599.矮牽牛的轉化實驗錶明,矮牽牛離體葉片被髮根農桿菌K599(帶pBIN-35S-GFP質粒)感染生根率達45%.對誘導的不定根基因組DNA的PCR檢測錶明,不定根基因組中含有髮根農桿菌K599 Ri質粒中的rolB基因和外源gfp基因;轉基因不定根在藍色光激髮下能髮齣彊烈的綠色熒光,錶明構建的轉基因載體pBIN-35S-GFP能實現gfp基因的高效錶達.該載體在CaMV 35S啟動子的兩耑各有一箇多剋隆位點,可以方便地進行啟動子替換,用于研究不同啟動子的功能.此外,該載體在gfp基因的5'耑含有多剋隆位點,在3'耑含有EcoR I和Bsm I兩箇單一酶切位點,可以方便地在5'耑連接上目標基因,錶達含GFP的融閤蛋白,進行目標基因編碼蛋白的亞細胞定位;也可以方便地切除gfp基因,連上需要的目的基因進行轉化.
이용pBIN19、pGFP화pCHS질립,성공구건료CaMV 35S계동자구동적gfp기인적식물전기인표체재체pBIN-35S-GFP,병도입야생형발근농간균K599.왜견우적전화실험표명,왜견우리체협편피발근농간균K599(대pBIN-35S-GFP질립)감염생근솔체45%.대유도적불정근기인조DNA적PCR검측표명,불정근기인조중함유발근농간균K599 Ri질립중적rolB기인화외원gfp기인;전기인불정근재람색광격발하능발출강렬적록색형광,표명구건적전기인재체pBIN-35S-GFP능실현gfp기인적고효표체.해재체재CaMV 35S계동자적량단각유일개다극륭위점,가이방편지진행계동자체환,용우연구불동계동자적공능.차외,해재체재gfp기인적5'단함유다극륭위점,재3'단함유EcoR I화Bsm I량개단일매절위점,가이방편지재5'단련접상목표기인,표체함GFP적융합단백,진행목표기인편마단백적아세포정위;야가이방편지절제gfp기인,련상수요적목적기인진행전화.
