CAJ | 학술논문

背景:目前视网膜缺血再灌注损伤仍没有一个理想的治疗方案,组织细胞工程尤其是干细胞工程的兴起为视网膜损伤的治疗提供了新思路.目的:以视网膜电图b波、视网膜形态学、神经节细胞密度及内层视网膜厚度为指标,观察骨髓间充质干细胞视网膜下移植对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响.设计、时间及地点:完全随机对照实验,于2007-01/12在潍坊医学院眼科研究所完成.材料:选择清洁级Wistar成年大鼠48只.方法:采用密度梯度离心法培养骨髓间充质干细胞.将48只大鼠按随机数字表法分为4组,每组12只.缺血再灌注损伤组采用Daniel法制备视网膜缺血再灌注损伤模型:缺血再灌注损伤后24 h,骨髓间充质干细胞移植组视网膜下移植 Hoechst33324标记的骨髓间充质干细胞2×108L-1;磷酸盐缓冲液组输注等量的磷酸盐缓冲液;正常对照组不做任何处理.主要观察指标:缺血再灌注损伤后6 h,24 h,3 d,7 d,14 d,28 d动态检测各组视网膜电图b波;缺血再灌注损伤后28 d荧光硅微镜下观察骨髓间充质干细胞移植组视网膜Hoechst33324阳性细胞表达情况;缺血冉灌注损伤后28 d处死各组大鼠,分别对视网膜进行苏木精一伊红、尼氏染色观察,检测并比较各组神经节细胞密度及视网膜内层厚度的变化.结果:缺血再灌注损伤后各时间点缺血再灌注损伤组大鼠视网膜电图b波逐渐降低,均显著低于正常对照组(P＜0.01);缺血再灌注损伤后28 d骨髓间充质干细胞移植组视网膜电图b波显著高于缺血再灌注损伤组(P＜0.01).缺血再灌注损伤后28 d骨髓间充质干细胞移植组视网膜各层均可见Hoechst阳性细胞,核染成蓝色.缺血再灌注损伤组视网膜神经节细胞密度与内层视网膜厚度显著小于正常对照组与骨髓间充质干细胞移植组(P＜0.05～0.01),缺血再灌注损伤组与磷酸盐缓冲液组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:视网膜缺血再灌注损伤后24 h骨髓问充质干细胞视网膜下移植,可以改善视网膜电图b波、增加神经节细胞密度及内层视网膜厚度,从而达到减轻视网膜缺血再灌注损伤的目的. 揹景:目前視網膜缺血再灌註損傷仍沒有一箇理想的治療方案,組織細胞工程尤其是榦細胞工程的興起為視網膜損傷的治療提供瞭新思路.目的:以視網膜電圖b波、視網膜形態學、神經節細胞密度及內層視網膜厚度為指標,觀察骨髓間充質榦細胞視網膜下移植對大鼠視網膜缺血再灌註損傷的影響.設計、時間及地點:完全隨機對照實驗,于2007-01/12在濰坊醫學院眼科研究所完成.材料:選擇清潔級Wistar成年大鼠48隻.方法:採用密度梯度離心法培養骨髓間充質榦細胞.將48隻大鼠按隨機數字錶法分為4組,每組12隻.缺血再灌註損傷組採用Daniel法製備視網膜缺血再灌註損傷模型:缺血再灌註損傷後24 h,骨髓間充質榦細胞移植組視網膜下移植 Hoechst33324標記的骨髓間充質榦細胞2×108L-1;燐痠鹽緩遲液組輸註等量的燐痠鹽緩遲液;正常對照組不做任何處理.主要觀察指標:缺血再灌註損傷後6 h,24 h,3 d,7 d,14 d,28 d動態檢測各組視網膜電圖b波;缺血再灌註損傷後28 d熒光硅微鏡下觀察骨髓間充質榦細胞移植組視網膜Hoechst33324暘性細胞錶達情況;缺血冉灌註損傷後28 d處死各組大鼠,分彆對視網膜進行囌木精一伊紅、尼氏染色觀察,檢測併比較各組神經節細胞密度及視網膜內層厚度的變化.結果:缺血再灌註損傷後各時間點缺血再灌註損傷組大鼠視網膜電圖b波逐漸降低,均顯著低于正常對照組(P＜0.01);缺血再灌註損傷後28 d骨髓間充質榦細胞移植組視網膜電圖b波顯著高于缺血再灌註損傷組(P＜0.01).缺血再灌註損傷後28 d骨髓間充質榦細胞移植組視網膜各層均可見Hoechst暘性細胞,覈染成藍色.缺血再灌註損傷組視網膜神經節細胞密度與內層視網膜厚度顯著小于正常對照組與骨髓間充質榦細胞移植組(P＜0.05～0.01),缺血再灌註損傷組與燐痠鹽緩遲液組差異無顯著性意義(P＞0.05).結論:視網膜缺血再灌註損傷後24 h骨髓問充質榦細胞視網膜下移植,可以改善視網膜電圖b波、增加神經節細胞密度及內層視網膜厚度,從而達到減輕視網膜缺血再灌註損傷的目的.
배경:목전시망막결혈재관주손상잉몰유일개이상적치료방안,조직세포공정우기시간세포공정적흥기위시망막손상적치료제공료신사로.목적:이시망막전도b파、시망막형태학、신경절세포밀도급내층시망막후도위지표,관찰골수간충질간세포시망막하이식대대서시망막결혈재관주손상적영향.설계、시간급지점:완전수궤대조실험,우2007-01/12재유방의학원안과연구소완성.재료:선택청길급Wistar성년대서48지.방법:채용밀도제도리심법배양골수간충질간세포.장48지대서안수궤수자표법분위4조,매조12지.결혈재관주손상조채용Daniel법제비시망막결혈재관주손상모형:결혈재관주손상후24 h,골수간충질간세포이식조시망막하이식 Hoechst33324표기적골수간충질간세포2×108L-1;린산염완충액조수주등량적린산염완충액;정상대조조불주임하처리.주요관찰지표:결혈재관주손상후6 h,24 h,3 d,7 d,14 d,28 d동태검측각조시망막전도b파;결혈재관주손상후28 d형광규미경하관찰골수간충질간세포이식조시망막Hoechst33324양성세포표체정황;결혈염관주손상후28 d처사각조대서,분별대시망막진행소목정일이홍、니씨염색관찰,검측병비교각조신경절세포밀도급시망막내층후도적변화.결과:결혈재관주손상후각시간점결혈재관주손상조대서시망막전도b파축점강저,균현저저우정상대조조(P＜0.01);결혈재관주손상후28 d골수간충질간세포이식조시망막전도b파현저고우결혈재관주손상조(P＜0.01).결혈재관주손상후28 d골수간충질간세포이식조시망막각층균가견Hoechst양성세포,핵염성람색.결혈재관주손상조시망막신경절세포밀도여내층시망막후도현저소우정상대조조여골수간충질간세포이식조(P＜0.05～0.01),결혈재관주손상조여린산염완충액조차이무현저성의의(P＞0.05).결론:시망막결혈재관주손상후24 h골수문충질간세포시망막하이식,가이개선시망막전도b파、증가신경절세포밀도급내층시망막후도,종이체도감경시망막결혈재관주손상적목적.