CAJ | 학술논문

目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定.方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性.结果:B7-2-PE40KDEL经12%SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算,其相对分子量为72 628,与理论预测值69 561相比误差在5%之内;全波长扫描分析显示该目的蛋白分别在225 nm和276 nm处各有一吸收峰;MALTI-TOF-MS质谱测定共获得15个与理论预测值相符的肽段,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明,在分子量为60 000～80 000的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白,证明本融合蛋白为全新蛋白,与我们预测的目的蛋白相符;Western blot实验显示B7-2-PE40KDEL能与人B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT杀伤活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28+的人T淋巴瘤细胞系Jurkat产生特异性杀伤,而对不表达的CD28-淋巴细胞系Raji无任何杀伤.结论:重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白为一全新的具有靶向B7:CD28细胞杀伤活性的蛋白质.
목적:대구건적신형중조B7-2-PE40KDEL외독소융합단백적부분표정진행분석감정.방법:채용SDS-PAGE상대분자량、이단백매소화적MALDI-TOF-MS질보、단백인적、전파장소묘화MTT법분별측정해융합단백상대분자량、태보、항원특이성이급파향살상생물학활성.결과:B7-2-PE40KDEL경12%SDS-PAGE단백전영화응효성상계통분석계산,기상대분자량위72 628,여이론예측치69 561상비오차재5%지내;전파장소묘분석현시해목적단백분별재225 nm화276 nm처각유일흡수봉;MALTI-TOF-MS질보측정공획득15개여이론예측치상부적태단,경서사생물신식연구소적EXPASY분자생물복무망참적Peptident수거고수색증명,재분자량위60 000～80 000적범위내미검색도여상술조건상부적이지단백,증명본융합단백위전신단백,여아문예측적목적단백상부;Western blot실험현시B7-2-PE40KDEL능여인B7-2급PEA항체특이성결합;MTT살상활성측정표명,해융합단백대표체CD28+적인T림파류세포계Jurkat산생특이성살상,이대불표체적CD28-림파세포계Raji무임하살상.결론:중조B7-2-PE40KDEL외독소융합단백위일전신적구유파향B7:CD28세포살상활성적단백질.