细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
2期
181-182,185
,共3页
黄湘%潘华政%王穗海%赵玉梅%李明
黃湘%潘華政%王穗海%趙玉梅%李明
황상%반화정%왕수해%조옥매%리명
真核表达质粒%SMMC-7721%XAPC7%构建%表达
真覈錶達質粒%SMMC-7721%XAPC7%構建%錶達
진핵표체질립%SMMC-7721%XAPC7%구건%표체
目的:构建pcDNA3.1(-)/XAPC7真核表达载体并检测其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达.方法:采用PCR法从pET28b/XAPC7重组质粒中克隆得到XAPC7 cDNA全长序列,将之与pMD18-T载体连接、测序后将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中.构建好的pcDNA3.1(-)/XAPC7真核表达质粒经酶切鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再应用半定量RT-PCR技术检测转染前后该细胞株XAPC7基因的mRNA表达水平.结果:pcDNA3.1(-)/XAPC7经酶切鉴定及DNA测序证实,目的基因XAPC7的序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR检测,重组质粒转染株的XAPC7基因mRNA表达水平高于对照组,证实XAPC7基因已经稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达.结论:成功地建立了人基因XAPC7的稳定转染细胞株,为进一步研究XAPC7的功能奠定了实验基础.
目的:構建pcDNA3.1(-)/XAPC7真覈錶達載體併檢測其在人肝癌細胞繫SMMC-7721中的錶達.方法:採用PCR法從pET28b/XAPC7重組質粒中剋隆得到XAPC7 cDNA全長序列,將之與pMD18-T載體連接、測序後將該片段亞剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1(-)中.構建好的pcDNA3.1(-)/XAPC7真覈錶達質粒經酶切鑒定後,採用脂質體法將該重組質粒轉染人肝癌細胞繫SMMC-7721,經G418篩選,得到暘性剋隆細胞株,再應用半定量RT-PCR技術檢測轉染前後該細胞株XAPC7基因的mRNA錶達水平.結果:pcDNA3.1(-)/XAPC7經酶切鑒定及DNA測序證實,目的基因XAPC7的序列完全正確,真覈錶達載體構建成功;經RT-PCR檢測,重組質粒轉染株的XAPC7基因mRNA錶達水平高于對照組,證實XAPC7基因已經穩定轉染到SMMC-7721細胞中併得到錶達.結論:成功地建立瞭人基因XAPC7的穩定轉染細胞株,為進一步研究XAPC7的功能奠定瞭實驗基礎.
목적:구건pcDNA3.1(-)/XAPC7진핵표체재체병검측기재인간암세포계SMMC-7721중적표체.방법:채용PCR법종pET28b/XAPC7중조질립중극륭득도XAPC7 cDNA전장서렬,장지여pMD18-T재체련접、측서후장해편단아극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(-)중.구건호적pcDNA3.1(-)/XAPC7진핵표체질립경매절감정후,채용지질체법장해중조질립전염인간암세포계SMMC-7721,경G418사선,득도양성극륭세포주,재응용반정량RT-PCR기술검측전염전후해세포주XAPC7기인적mRNA표체수평.결과:pcDNA3.1(-)/XAPC7경매절감정급DNA측서증실,목적기인XAPC7적서렬완전정학,진핵표체재체구건성공;경RT-PCR검측,중조질립전염주적XAPC7기인mRNA표체수평고우대조조,증실XAPC7기인이경은정전염도SMMC-7721세포중병득도표체.결론:성공지건립료인기인XAPC7적은정전염세포주,위진일보연구XAPC7적공능전정료실험기출.
