西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
1期
17-22
,共6页
尚书文%侯继波%徐公豹%牛明福%王秀清%何家惠%陈溥言%姜平
尚書文%侯繼波%徐公豹%牛明福%王秀清%何傢惠%陳溥言%薑平
상서문%후계파%서공표%우명복%왕수청%하가혜%진부언%강평
禽流感病毒%M2e基因%鸡IgG Fc基因%巴斯德毕赤酵母
禽流感病毒%M2e基因%鷄IgG Fc基因%巴斯德畢赤酵母
금류감병독%M2e기인%계IgG Fc기인%파사덕필적효모
[目的]得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础.[方法]根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgG Fc片段基因一起克隆入毕赤酵母表达质粒中,构建酵母表达载体.将阳性质粒线性化后电转化入感受态毕赤酵母X-33中,再经甲醇诱导后,通过Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定融合蛋白.之后用其免疫非免疫鸡,检验其免疫原性.[结果]成功构建了表达M2e和Fc融合蛋白的酵母表达载体pPICZαA-M2-Fc,并通过Zeocin筛选及PCR鉴定出了阳性重组子;阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定证实,融合蛋白得到正确表达,并且可以与M2e阳性血清反应.动物免疫试验证实,该融合蛋白可以诱导鸡产生抗M2e抗体,具有良好的免疫原性.[结论]融合蛋白M2e-Fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达,该融合蛋白具有较好的免疫原性,为后期进行其他免疫试验奠定了基础.
[目的]得到融閤蛋白M2e-Fc,併檢測其免疫學特性,為研製禽流感通用疫苗奠定基礎.[方法]根據禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基痠序列設計2條長互補引物,通過重疊區互補擴增基因法擴增齣目的基因M2e,然後與鷄IgG Fc片段基因一起剋隆入畢赤酵母錶達質粒中,構建酵母錶達載體.將暘性質粒線性化後電轉化入感受態畢赤酵母X-33中,再經甲醇誘導後,通過Tricine-SDS-PAGE電泳及Western-blotting鑒定融閤蛋白.之後用其免疫非免疫鷄,檢驗其免疫原性.[結果]成功構建瞭錶達M2e和Fc融閤蛋白的酵母錶達載體pPICZαA-M2-Fc,併通過Zeocin篩選及PCR鑒定齣瞭暘性重組子;暘性重組子經甲醇誘導後得到融閤蛋白,Tricine-SDS-PAGE電泳及Western-blotting鑒定證實,融閤蛋白得到正確錶達,併且可以與M2e暘性血清反應.動物免疫試驗證實,該融閤蛋白可以誘導鷄產生抗M2e抗體,具有良好的免疫原性.[結論]融閤蛋白M2e-Fc在巴斯德畢赤酵母錶達繫統中得到瞭成功錶達,該融閤蛋白具有較好的免疫原性,為後期進行其他免疫試驗奠定瞭基礎.
[목적]득도융합단백M2e-Fc,병검측기면역학특성,위연제금류감통용역묘전정기출.[방법]근거금류감병독H5N1적M2e단백안기산서렬설계2조장호보인물,통과중첩구호보확증기인법확증출목적기인M2e,연후여계IgG Fc편단기인일기극륭입필적효모표체질립중,구건효모표체재체.장양성질립선성화후전전화입감수태필적효모X-33중,재경갑순유도후,통과Tricine-SDS-PAGE전영급Western-blotting감정융합단백.지후용기면역비면역계,검험기면역원성.[결과]성공구건료표체M2e화Fc융합단백적효모표체재체pPICZαA-M2-Fc,병통과Zeocin사선급PCR감정출료양성중조자;양성중조자경갑순유도후득도융합단백,Tricine-SDS-PAGE전영급Western-blotting감정증실,융합단백득도정학표체,병차가이여M2e양성혈청반응.동물면역시험증실,해융합단백가이유도계산생항M2e항체,구유량호적면역원성.[결론]융합단백M2e-Fc재파사덕필적효모표체계통중득도료성공표체,해융합단백구유교호적면역원성,위후기진행기타면역시험전정료기출.
