CAJ | 학술논문

目的:观察腺病毒介导MHCⅡ类分子(major histocompatibility complex class Ⅱ molecules)反式激活因子突变体(CⅡTAm)基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)的效果,并探讨其可能的作用机制.方法:31只健康雌性CBA/J小鼠随机分成EAT模型组(n=8)、CⅡTAm治疗组(n=9)、GFP对照组(n=9)和正常对照组(n=5).除正常对照组不作特殊处理外,其余3组均以猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin,pTg)+弗氏佐剂(complete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,CⅡTAm治疗组和GFP对照组分别静脉注射重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm及Ad-GFP进行治疗,EAT模型组注射等量生理盐水.首次免疫后第29日处死小鼠,进行H-E染色观察甲状腺病理形态;免疫组织化学染色测定甲状腺MHCⅡ类分子表达;分析pTg刺激下脾脏淋巴细胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法检测血浆中抗-pTg自身抗体滴度;流式细胞术分析外周血和脾脏淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞上可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)的表达水平.结果:H-E染色结果表明,CⅡTAm治疗组甲状腺淋巴细胞浸润指数(0.3±0.5)低于EAT模型组(1.4±0.4)和GFP对照组(1.5±0.2,P＜0.01).免疫组化结果显示,EAT模型组和GFP对照组甲状腺组织有弥漫性MHCⅡ类分子表达,而CⅡTAm治疗组未见明显表达,正常对照组表达呈阴性.80 μg/mlpTg刺激下,CⅡTAm治疗组小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)明显低于EAT模型组或GFP对照组(P＜0.05);培养上清各组IFN-γ分泌水平与SI结果类似(P＜0.01).CⅡTAm治疗组血浆抗-pTg自身抗体滴度显著低于EAT模型组或GFP对照组(P＜0.01);CⅡTAm治疗组外周血和脾脏CD4+T细胞ICOS分子阳性表达率亦显著低于EAT模型组或GFP对照组(P＜0.01).结论:重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm能抑制EAT小鼠甲状腺组织MHCⅡ类分子表达,抑制自身反应性T细胞增殖,减轻甲状腺炎性细胞浸润,降低自身抗体滴度,对EAT有一定的治疗作用. 目的:觀察腺病毒介導MHCⅡ類分子(major histocompatibility complex class Ⅱ molecules)反式激活因子突變體(CⅡTAm)基因治療小鼠實驗性自身免疫性甲狀腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)的效果,併探討其可能的作用機製.方法:31隻健康雌性CBA/J小鼠隨機分成EAT模型組(n=8)、CⅡTAm治療組(n=9)、GFP對照組(n=9)和正常對照組(n=5).除正常對照組不作特殊處理外,其餘3組均以豬甲狀腺毬蛋白(porcine thyroglobulin,pTg)+弗氏佐劑(complete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,CⅡTAm治療組和GFP對照組分彆靜脈註射重組腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm及Ad-GFP進行治療,EAT模型組註射等量生理鹽水.首次免疫後第29日處死小鼠,進行H-E染色觀察甲狀腺病理形態;免疫組織化學染色測定甲狀腺MHCⅡ類分子錶達;分析pTg刺激下脾髒淋巴細胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法檢測血漿中抗-pTg自身抗體滴度;流式細胞術分析外週血和脾髒淋巴細胞中CD4+T淋巴細胞上可誘導共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)的錶達水平.結果:H-E染色結果錶明,CⅡTAm治療組甲狀腺淋巴細胞浸潤指數(0.3±0.5)低于EAT模型組(1.4±0.4)和GFP對照組(1.5±0.2,P＜0.01).免疫組化結果顯示,EAT模型組和GFP對照組甲狀腺組織有瀰漫性MHCⅡ類分子錶達,而CⅡTAm治療組未見明顯錶達,正常對照組錶達呈陰性.80 μg/mlpTg刺激下,CⅡTAm治療組小鼠淋巴細胞刺激指數(SI)明顯低于EAT模型組或GFP對照組(P＜0.05);培養上清各組IFN-γ分泌水平與SI結果類似(P＜0.01).CⅡTAm治療組血漿抗-pTg自身抗體滴度顯著低于EAT模型組或GFP對照組(P＜0.01);CⅡTAm治療組外週血和脾髒CD4+T細胞ICOS分子暘性錶達率亦顯著低于EAT模型組或GFP對照組(P＜0.01).結論:重組腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm能抑製EAT小鼠甲狀腺組織MHCⅡ類分子錶達,抑製自身反應性T細胞增殖,減輕甲狀腺炎性細胞浸潤,降低自身抗體滴度,對EAT有一定的治療作用.
목적:관찰선병독개도MHCⅡ류분자(major histocompatibility complex class Ⅱ molecules)반식격활인자돌변체(CⅡTAm)기인치료소서실험성자신면역성갑상선염(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)적효과,병탐토기가능적작용궤제.방법:31지건강자성CBA/J소서수궤분성EAT모형조(n=8)、CⅡTAm치료조(n=9)、GFP대조조(n=9)화정상대조조(n=5).제정상대조조불작특수처리외,기여3조균이저갑상선구단백(porcine thyroglobulin,pTg)+불씨좌제(complete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)건립EAT소서모형,CⅡTAm치료조화GFP대조조분별정맥주사중조선병독Ad-CMV-CⅡTAm급Ad-GFP진행치료,EAT모형조주사등량생리염수.수차면역후제29일처사소서,진행H-E염색관찰갑상선병리형태;면역조직화학염색측정갑상선MHCⅡ류분자표체;분석pTg자격하비장림파세포적증식급기상청액중IFN-γ적분비수평;ELISA법검측혈장중항-pTg자신항체적도;류식세포술분석외주혈화비장림파세포중CD4+T림파세포상가유도공자격분자(inducible costimulator,ICOS)적표체수평.결과:H-E염색결과표명,CⅡTAm치료조갑상선림파세포침윤지수(0.3±0.5)저우EAT모형조(1.4±0.4)화GFP대조조(1.5±0.2,P＜0.01).면역조화결과현시,EAT모형조화GFP대조조갑상선조직유미만성MHCⅡ류분자표체,이CⅡTAm치료조미견명현표체,정상대조조표체정음성.80 μg/mlpTg자격하,CⅡTAm치료조소서림파세포자격지수(SI)명현저우EAT모형조혹GFP대조조(P＜0.05);배양상청각조IFN-γ분비수평여SI결과유사(P＜0.01).CⅡTAm치료조혈장항-pTg자신항체적도현저저우EAT모형조혹GFP대조조(P＜0.01);CⅡTAm치료조외주혈화비장CD4+T세포ICOS분자양성표체솔역현저저우EAT모형조혹GFP대조조(P＜0.01).결론:중조선병독Ad-CMV-CⅡTAm능억제EAT소서갑상선조직MHCⅡ류분자표체,억제자신반응성T세포증식,감경갑상선염성세포침윤,강저자신항체적도,대EAT유일정적치료작용.