中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
12期
22-25
,共4页
肖业臣%秦玉侠%解佳森%刘孝菊%庞实锋%杨婉莹%李校堃
肖業臣%秦玉俠%解佳森%劉孝菊%龐實鋒%楊婉瑩%李校堃
초업신%진옥협%해가삼%류효국%방실봉%양완형%리교곤
抗真菌肽%Drosomycin%Sumo分子伴侣
抗真菌肽%Drosomycin%Sumo分子伴侶
항진균태%Drosomycin%Sumo분자반려
利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融合基因,将其插入到表达载体pET-3c中,构建出重组表达质粒pET-3c-SD,并转化至大肠杆茵BL21(DE3)中.筛选重组转化子,进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析.结果表明在30℃条件下,用0.5mmol/L IPTG诱导3h后,目的蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白的22%,其中可溶性蛋白超过了目的蛋白的80%.经过Ni-NTA纯化后,融合蛋白的纯度可达95%以上.抑菌实验表明,该融合蛋白对白僵菌(Beauveria bassiana)具有一定的抑真菌活性.证实了使用分子伴侣Sumo融合表达对具有多个二硫键的小分子多肽的表达是非常有效的.
利用PCR引物延伸的方法閤成瞭分子伴侶Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融閤基因,將其插入到錶達載體pET-3c中,構建齣重組錶達質粒pET-3c-SD,併轉化至大腸桿茵BL21(DE3)中.篩選重組轉化子,進行錶達條件的優化和錶達產物的可溶性分析.結果錶明在30℃條件下,用0.5mmol/L IPTG誘導3h後,目的蛋白錶達量最高,約佔菌體總蛋白的22%,其中可溶性蛋白超過瞭目的蛋白的80%.經過Ni-NTA純化後,融閤蛋白的純度可達95%以上.抑菌實驗錶明,該融閤蛋白對白僵菌(Beauveria bassiana)具有一定的抑真菌活性.證實瞭使用分子伴侶Sumo融閤錶達對具有多箇二硫鍵的小分子多肽的錶達是非常有效的.
이용PCR인물연신적방법합성료분자반려Sumo화항진균태Drosomycin적융합기인,장기삽입도표체재체pET-3c중,구건출중조표체질립pET-3c-SD,병전화지대장간인BL21(DE3)중.사선중조전화자,진행표체조건적우화화표체산물적가용성분석.결과표명재30℃조건하,용0.5mmol/L IPTG유도3h후,목적단백표체량최고,약점균체총단백적22%,기중가용성단백초과료목적단백적80%.경과Ni-NTA순화후,융합단백적순도가체95%이상.억균실험표명,해융합단백대백강균(Beauveria bassiana)구유일정적억진균활성.증실료사용분자반려Sumo융합표체대구유다개이류건적소분자다태적표체시비상유효적.
