微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
6期
1055-1059
,共5页
唐梦君%王红宁%周生%黄勇%柳萍%胡慧琼%廖娟
唐夢君%王紅寧%週生%黃勇%柳萍%鬍慧瓊%廖娟
당몽군%왕홍저%주생%황용%류평%호혜경%료연
禽传染性支气管炎病毒%S1基因%IL-2%双顺反子%DNA疫苗
禽傳染性支氣管炎病毒%S1基因%IL-2%雙順反子%DNA疫苗
금전염성지기관염병독%S1기인%IL-2%쌍순반자%DNA역묘
为了研制更加有效的IBV DNA疫苗,将IBV的S1基因和禽白介素2(IL-2)基因插入双顺反子表达载体pIRES-EGFP/DsRed中,构建能分别或同时表达S1基因和IL-2基因的pIRES-S1、pIRES-IL2、pIRES-S1/IL-2质粒.通过脂质体转染Vero细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测表达.将构建的质粒用脂质体包裹后,通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄雏鸡,二免后两周用IBV肾型强毒进行攻毒.结果表明,pIRES-S1/IL-2在体外能够诱导Vero细胞表达S1蛋白和IL-2;pIRES-S1/IL-2和pIRES-S1+pIRES-IL2免疫雏鸡后均能促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,能明显增强IBV DNA疫苗对同型强毒的攻击保护,但pIRES-S1/IL-2免疫组要优于pIRES-S1+pIRES-IL2混合免疫组及其它对照组,差异显著或极显著.以上结果表明禽IL-2能同时加强DNA疫苗的细胞免疫和体液免疫应答;但抗原基因和IL-2共表达DNA疫苗的免疫效果明显要优于混合注射的DNA疫苗.
為瞭研製更加有效的IBV DNA疫苗,將IBV的S1基因和禽白介素2(IL-2)基因插入雙順反子錶達載體pIRES-EGFP/DsRed中,構建能分彆或同時錶達S1基因和IL-2基因的pIRES-S1、pIRES-IL2、pIRES-S1/IL-2質粒.通過脂質體轉染Vero細胞,利用RT-PCR及間接免疫熒光檢測錶達.將構建的質粒用脂質體包裹後,通過腿部肌肉多點註射免疫7日齡雛鷄,二免後兩週用IBV腎型彊毒進行攻毒.結果錶明,pIRES-S1/IL-2在體外能夠誘導Vero細胞錶達S1蛋白和IL-2;pIRES-S1/IL-2和pIRES-S1+pIRES-IL2免疫雛鷄後均能促進外週血T淋巴細胞亞群數量和血清中特異性抗體水平的增加,能明顯增彊IBV DNA疫苗對同型彊毒的攻擊保護,但pIRES-S1/IL-2免疫組要優于pIRES-S1+pIRES-IL2混閤免疫組及其它對照組,差異顯著或極顯著.以上結果錶明禽IL-2能同時加彊DNA疫苗的細胞免疫和體液免疫應答;但抗原基因和IL-2共錶達DNA疫苗的免疫效果明顯要優于混閤註射的DNA疫苗.
위료연제경가유효적IBV DNA역묘,장IBV적S1기인화금백개소2(IL-2)기인삽입쌍순반자표체재체pIRES-EGFP/DsRed중,구건능분별혹동시표체S1기인화IL-2기인적pIRES-S1、pIRES-IL2、pIRES-S1/IL-2질립.통과지질체전염Vero세포,이용RT-PCR급간접면역형광검측표체.장구건적질립용지질체포과후,통과퇴부기육다점주사면역7일령추계,이면후량주용IBV신형강독진행공독.결과표명,pIRES-S1/IL-2재체외능구유도Vero세포표체S1단백화IL-2;pIRES-S1/IL-2화pIRES-S1+pIRES-IL2면역추계후균능촉진외주혈T림파세포아군수량화혈청중특이성항체수평적증가,능명현증강IBV DNA역묘대동형강독적공격보호,단pIRES-S1/IL-2면역조요우우pIRES-S1+pIRES-IL2혼합면역조급기타대조조,차이현저혹겁현저.이상결과표명금IL-2능동시가강DNA역묘적세포면역화체액면역응답;단항원기인화IL-2공표체DNA역묘적면역효과명현요우우혼합주사적DNA역묘.
