水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2007年
6期
788-798
,共11页
王琳%梁旭方%廖婉琴%雷腊梅%韩博平
王琳%樑旭方%廖婉琴%雷臘梅%韓博平
왕림%량욱방%료완금%뢰석매%한박평
罗非鱼%可溶性谷胱甘肽S-转移酶%谷胱甘肽过氧化物酶%解偶联蛋白2%分子克隆%活体诱导表达%微囊藻毒素
囉非魚%可溶性穀胱甘肽S-轉移酶%穀胱甘肽過氧化物酶%解偶聯蛋白2%分子剋隆%活體誘導錶達%微囊藻毒素
라비어%가용성곡광감태S-전이매%곡광감태과양화물매%해우련단백2%분자극륭%활체유도표체%미낭조독소
可溶性谷胱甘肽S-转移酶(Soluble glutathione S-transferase, sGST)催化微囊藻毒素(Microcystins,MCs)与还原型谷胱甘肽(GSH)的加合去毒代谢过程,谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPX)为sGST的去毒反应提供GSH,解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2, UCP2)则可抑制微囊藻毒素诱发活性氧导致的肝细胞凋亡.本研究从罗非鱼肝脏通过简并引物克隆sGST、GPX与UCP2基因cDNA核心序列,并应用5'RACE和3'RACE技术分别扩增罗非鱼肝脏sGST基因cDNA序列5'末端和3'末端序列而获得其cDNA全序列.罗非鱼肝脏sGST基因cDNA全序列长861 bp, 其中5'非翻译区(5'-UTR)为25 bp,3'非翻译区(3'-UTR)为167 bp,开放阅读框(ORF)为669 bp,编码222个氨基酸,包含脊椎动物完整sGST的2个功能域:N-末端功能域(GSH结合位点)和C-末端功能域(底物结合位点).罗非鱼sGST与真鲷、条石鲷(Oplegnathus fasciatus)、斑马鱼同源性较高,达到64.3%-78.5%,而与人、大鼠、小鼠、牛、猪、鸡差异较大,氨基酸同源性为48.2%-55.9%.罗非鱼肝脏GPX、UCP2基因cDNA核心序列长280 bp、776 bp,分别编码92、258个氨基酸.罗非鱼GPX与条石鲷、虹鳟、斑马鱼、人、大鼠、小鼠、牛、猪GPX同源性均较高,达到69.6%-85.9%.罗非鱼UCP2与真鲷、斑马鱼、鲤鱼、欧洲白鲑(Leuciscus cephalus)、草鱼、人、大鼠、小鼠UCP2同源性更高,达到71.8%-93.8%.通过对罗非鱼(5-8 g)活体腹腔注射亚致死量MC-LR(50 μg/kg bwt),发现微囊藻毒素对罗非鱼肝脏sGST基因表达有显著的诱导作用(p< 0.05),注射微囊藻毒素24h后sGST基因mRNA表达水平上调80%.注射微囊藻毒素24h后,虽然罗非鱼肝脏GPX与UCP2基因mRNA表达水平亦出现明显的升高趋势,但两者均未出现显著性的变化(p >0.05).本研究从基因表达调控的角度证实,罗非鱼肝脏sGST在微囊藻毒素去毒过程中可能发挥关键作用,同时也说明罗非鱼肝脏GPX、UCP2基因可能在微囊藻去毒过程中发挥协同作用.
可溶性穀胱甘肽S-轉移酶(Soluble glutathione S-transferase, sGST)催化微囊藻毒素(Microcystins,MCs)與還原型穀胱甘肽(GSH)的加閤去毒代謝過程,穀胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPX)為sGST的去毒反應提供GSH,解偶聯蛋白2(Uncoupling protein 2, UCP2)則可抑製微囊藻毒素誘髮活性氧導緻的肝細胞凋亡.本研究從囉非魚肝髒通過簡併引物剋隆sGST、GPX與UCP2基因cDNA覈心序列,併應用5'RACE和3'RACE技術分彆擴增囉非魚肝髒sGST基因cDNA序列5'末耑和3'末耑序列而穫得其cDNA全序列.囉非魚肝髒sGST基因cDNA全序列長861 bp, 其中5'非翻譯區(5'-UTR)為25 bp,3'非翻譯區(3'-UTR)為167 bp,開放閱讀框(ORF)為669 bp,編碼222箇氨基痠,包含脊椎動物完整sGST的2箇功能域:N-末耑功能域(GSH結閤位點)和C-末耑功能域(底物結閤位點).囉非魚sGST與真鯛、條石鯛(Oplegnathus fasciatus)、斑馬魚同源性較高,達到64.3%-78.5%,而與人、大鼠、小鼠、牛、豬、鷄差異較大,氨基痠同源性為48.2%-55.9%.囉非魚肝髒GPX、UCP2基因cDNA覈心序列長280 bp、776 bp,分彆編碼92、258箇氨基痠.囉非魚GPX與條石鯛、虹鱒、斑馬魚、人、大鼠、小鼠、牛、豬GPX同源性均較高,達到69.6%-85.9%.囉非魚UCP2與真鯛、斑馬魚、鯉魚、歐洲白鮭(Leuciscus cephalus)、草魚、人、大鼠、小鼠UCP2同源性更高,達到71.8%-93.8%.通過對囉非魚(5-8 g)活體腹腔註射亞緻死量MC-LR(50 μg/kg bwt),髮現微囊藻毒素對囉非魚肝髒sGST基因錶達有顯著的誘導作用(p< 0.05),註射微囊藻毒素24h後sGST基因mRNA錶達水平上調80%.註射微囊藻毒素24h後,雖然囉非魚肝髒GPX與UCP2基因mRNA錶達水平亦齣現明顯的升高趨勢,但兩者均未齣現顯著性的變化(p >0.05).本研究從基因錶達調控的角度證實,囉非魚肝髒sGST在微囊藻毒素去毒過程中可能髮揮關鍵作用,同時也說明囉非魚肝髒GPX、UCP2基因可能在微囊藻去毒過程中髮揮協同作用.
가용성곡광감태S-전이매(Soluble glutathione S-transferase, sGST)최화미낭조독소(Microcystins,MCs)여환원형곡광감태(GSH)적가합거독대사과정,곡광감태과양화물매(Glutathione peroxidase, GPX)위sGST적거독반응제공GSH,해우련단백2(Uncoupling protein 2, UCP2)칙가억제미낭조독소유발활성양도치적간세포조망.본연구종라비어간장통과간병인물극륭sGST、GPX여UCP2기인cDNA핵심서렬,병응용5'RACE화3'RACE기술분별확증라비어간장sGST기인cDNA서렬5'말단화3'말단서렬이획득기cDNA전서렬.라비어간장sGST기인cDNA전서렬장861 bp, 기중5'비번역구(5'-UTR)위25 bp,3'비번역구(3'-UTR)위167 bp,개방열독광(ORF)위669 bp,편마222개안기산,포함척추동물완정sGST적2개공능역:N-말단공능역(GSH결합위점)화C-말단공능역(저물결합위점).라비어sGST여진조、조석조(Oplegnathus fasciatus)、반마어동원성교고,체도64.3%-78.5%,이여인、대서、소서、우、저、계차이교대,안기산동원성위48.2%-55.9%.라비어간장GPX、UCP2기인cDNA핵심서렬장280 bp、776 bp,분별편마92、258개안기산.라비어GPX여조석조、홍준、반마어、인、대서、소서、우、저GPX동원성균교고,체도69.6%-85.9%.라비어UCP2여진조、반마어、리어、구주백해(Leuciscus cephalus)、초어、인、대서、소서UCP2동원성경고,체도71.8%-93.8%.통과대라비어(5-8 g)활체복강주사아치사량MC-LR(50 μg/kg bwt),발현미낭조독소대라비어간장sGST기인표체유현저적유도작용(p< 0.05),주사미낭조독소24h후sGST기인mRNA표체수평상조80%.주사미낭조독소24h후,수연라비어간장GPX여UCP2기인mRNA표체수평역출현명현적승고추세,단량자균미출현현저성적변화(p >0.05).본연구종기인표체조공적각도증실,라비어간장sGST재미낭조독소거독과정중가능발휘관건작용,동시야설명라비어간장GPX、UCP2기인가능재미낭조거독과정중발휘협동작용.
