重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2007年
1期
8-11
,共4页
季业伟%聂滨%李平%徐晓玉%周元国
季業偉%聶濱%李平%徐曉玉%週元國
계업위%섭빈%리평%서효옥%주원국
热休克蛋白90%RNAi%基因转染%应激
熱休剋蛋白90%RNAi%基因轉染%應激
열휴극단백90%RNAi%기인전염%응격
目的:构建能表达小发夹RNA,从而特异、有效抑制人Hsp90βmRNA水平的质粒,比较该质粒对不同细胞株的转染效率.方法:合成3条对应于靶基因3个区域的64nt寡聚核苷酸,插入pSUPER EGFP1质粒,用DH5α细菌扩增,用酶切和测序法鉴定.以绿色荧光蛋白表达为标记,比较不同比例脂质体和质粒条件下,HepG2、HUVEC、HeK293 3种细胞株的转染效率.结果:构建的pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β3 3个重组沉默质粒,插入片段碱基完全正确.在相同条件下,所构建的质粒对HeK293细胞转染效率最高,HepG2细胞最低.结论:利用pSUPER质粒可成功构建人Hsp90β基因沉默质粒,该质粒对细胞株的转染效率可因细胞的不同而有显著差异.
目的:構建能錶達小髮夾RNA,從而特異、有效抑製人Hsp90βmRNA水平的質粒,比較該質粒對不同細胞株的轉染效率.方法:閤成3條對應于靶基因3箇區域的64nt寡聚覈苷痠,插入pSUPER EGFP1質粒,用DH5α細菌擴增,用酶切和測序法鑒定.以綠色熒光蛋白錶達為標記,比較不同比例脂質體和質粒條件下,HepG2、HUVEC、HeK293 3種細胞株的轉染效率.結果:構建的pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β3 3箇重組沉默質粒,插入片段堿基完全正確.在相同條件下,所構建的質粒對HeK293細胞轉染效率最高,HepG2細胞最低.結論:利用pSUPER質粒可成功構建人Hsp90β基因沉默質粒,該質粒對細胞株的轉染效率可因細胞的不同而有顯著差異.
목적:구건능표체소발협RNA,종이특이、유효억제인Hsp90βmRNA수평적질립,비교해질립대불동세포주적전염효솔.방법:합성3조대응우파기인3개구역적64nt과취핵감산,삽입pSUPER EGFP1질립,용DH5α세균확증,용매절화측서법감정.이록색형광단백표체위표기,비교불동비례지질체화질립조건하,HepG2、HUVEC、HeK293 3충세포주적전염효솔.결과:구건적pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β3 3개중조침묵질립,삽입편단감기완전정학.재상동조건하,소구건적질립대HeK293세포전염효솔최고,HepG2세포최저.결론:이용pSUPER질립가성공구건인Hsp90β기인침묵질립,해질립대세포주적전염효솔가인세포적불동이유현저차이.
