中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2006年
7期
64-68
,共5页
苎麻%ISSR%体系优化
苧痳%ISSR%體繫優化
저마%ISSR%체계우화
ISSR分子标记是在SSR标记基础上发展起来的一种新技术,ISSR标记成孟德尔式遗传,在多数物种中是显性的,目前已经广泛应用于植物品种鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性、进化及分子生态学当中.笔者以苎麻自交系品种为材料,研究了苎麻ISSR分析过程中的影响因素,包括10×PCR Buffer、模板浓度、Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、循环次数、退火温度等,建立了适于苎麻ISSR分析的PCR反应体系:即在20ul反应体系中,引物浓度为1.0umol/L;模板DNA的用量为60～100ng;Mg2+浓度为2.0mmol/L;dNTP浓度为0.2 mmol/L;Taq酶用量为1U.适宜的扩增程序为先94℃变性5min,再94℃变性30sec、56℃复性45sec、72℃延伸90sec共34个循环,最后72℃延伸7mm,4℃保存.
ISSR分子標記是在SSR標記基礎上髮展起來的一種新技術,ISSR標記成孟德爾式遺傳,在多數物種中是顯性的,目前已經廣汎應用于植物品種鑒定、遺傳作圖、基因定位、遺傳多樣性、進化及分子生態學噹中.筆者以苧痳自交繫品種為材料,研究瞭苧痳ISSR分析過程中的影響因素,包括10×PCR Buffer、模闆濃度、Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、循環次數、退火溫度等,建立瞭適于苧痳ISSR分析的PCR反應體繫:即在20ul反應體繫中,引物濃度為1.0umol/L;模闆DNA的用量為60～100ng;Mg2+濃度為2.0mmol/L;dNTP濃度為0.2 mmol/L;Taq酶用量為1U.適宜的擴增程序為先94℃變性5min,再94℃變性30sec、56℃複性45sec、72℃延伸90sec共34箇循環,最後72℃延伸7mm,4℃保存.
ISSR분자표기시재SSR표기기출상발전기래적일충신기술,ISSR표기성맹덕이식유전,재다수물충중시현성적,목전이경엄범응용우식물품충감정、유전작도、기인정위、유전다양성、진화급분자생태학당중.필자이저마자교계품충위재료,연구료저마ISSR분석과정중적영향인소,포괄10×PCR Buffer、모판농도、Mg2+、dNTP、인물、Taq매、순배차수、퇴화온도등,건립료괄우저마ISSR분석적PCR반응체계:즉재20ul반응체계중,인물농도위1.0umol/L;모판DNA적용량위60～100ng;Mg2+농도위2.0mmol/L;dNTP농도위0.2 mmol/L;Taq매용량위1U.괄의적확증정서위선94℃변성5min,재94℃변성30sec、56℃복성45sec、72℃연신90sec공34개순배,최후72℃연신7mm,4℃보존.
