CAJ | 학술논문

ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点.本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zona pellucida 3 gene of Lagurus lagurus, lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3 mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对lZP3 mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-lZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-based transfection method, HD法)共注射小鼠,半定量RT-PCR和real-time PCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中lZP3 mRNA的表达情况,以筛选干扰lZP3 mRNA的有效靶位点.结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hela细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰lZP3 mRNA的表达.研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法.
ZP3작위정자결합적파대상재란모세포수정중기착관건작용,야인차이성위연구포유동물수정궤리적초점.본연구삼조신강초원토미서란투명대3(zona pellucida 3 gene of Lagurus lagurus, lZP3)적mRNA,선택료침대lZP3 mRNA적3개구역합성과취핵감산련접도간우재체pGenesil-1상,구건료3개침대lZP3 mRNA적중조간우재체,화pCDNA3-lZP3표체재체채용지질체법공전염Hela세포이급통과미정맥대용량쾌속주사법(Hydrodynamics-based transfection method, HD법)공주사소서,반정량RT-PCR화real-time PCR검측Hela세포화소서간장중lZP3 mRNA적표체정황,이사선간우lZP3 mRNA적유효파위점.결과표명,통과HD법공주사간우재체화표체재체후,외원기인mRNA재소서간장중적표체화공전염Hela세포후재Hela세포중적표체정황시일치적,유2개간우재체가이유효간우lZP3 mRNA적표체.연구환설명,이용HD법이소서작위실험재료사선RNA간우적유효파위점시일조절실가행적방법.