中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2005年
6期
415-418
,共4页
李文姝%陆惠民%闵太善%黄伟达
李文姝%陸惠民%閔太善%黃偉達
리문주%륙혜민%민태선%황위체
弓形虫%棒状体蛋白%膜表面蛋白1%克隆%表达
弓形蟲%棒狀體蛋白%膜錶麵蛋白1%剋隆%錶達
궁형충%봉상체단백%막표면단백1%극륭%표체
目的进行弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合基因的克隆与表达,为弓形虫ROP2-P30基因工程复合抗原的制备做准备.方法半套式PCR扩增编码弓形虫P30的基因片段,克隆至已构建成功的重组质粒pUC119/ROP2中,经PCR和酶切鉴定正确的重组质粒pUC119/ROP2-P30再以SacⅠ/HindⅢ双酶切克隆至表达载体pET28b上,鉴定正确的重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠埃希菌表达菌株BL21-Codon Plus(DE3)-RIL,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出700 bp P30基因片段,成功构建重组质粒pET28b/ROP2-P30,该质粒经PCR和酶切鉴定,与预期结果一致,并在大肠埃希菌中高效表达,产生相对分子质量(Mr)约为69 000的重组目的蛋白.结论弓形虫ROP2和P301融合基因克隆成功,并表达出预期的复合重组蛋白ROP2-P30.
目的進行弓形蟲棒狀體蛋白2(ROP2)和膜錶麵蛋白1(P30)融閤基因的剋隆與錶達,為弓形蟲ROP2-P30基因工程複閤抗原的製備做準備.方法半套式PCR擴增編碼弓形蟲P30的基因片段,剋隆至已構建成功的重組質粒pUC119/ROP2中,經PCR和酶切鑒定正確的重組質粒pUC119/ROP2-P30再以SacⅠ/HindⅢ雙酶切剋隆至錶達載體pET28b上,鑒定正確的重組質粒pET28b/ROP2-P30轉化大腸埃希菌錶達菌株BL21-Codon Plus(DE3)-RIL,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達.結果從弓形蟲RH株基因組DNA中擴增齣700 bp P30基因片段,成功構建重組質粒pET28b/ROP2-P30,該質粒經PCR和酶切鑒定,與預期結果一緻,併在大腸埃希菌中高效錶達,產生相對分子質量(Mr)約為69 000的重組目的蛋白.結論弓形蟲ROP2和P301融閤基因剋隆成功,併錶達齣預期的複閤重組蛋白ROP2-P30.
목적진행궁형충봉상체단백2(ROP2)화막표면단백1(P30)융합기인적극륭여표체,위궁형충ROP2-P30기인공정복합항원적제비주준비.방법반투식PCR확증편마궁형충P30적기인편단,극륭지이구건성공적중조질립pUC119/ROP2중,경PCR화매절감정정학적중조질립pUC119/ROP2-P30재이SacⅠ/HindⅢ쌍매절극륭지표체재체pET28b상,감정정학적중조질립pET28b/ROP2-P30전화대장애희균표체균주BL21-Codon Plus(DE3)-RIL,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체.결과종궁형충RH주기인조DNA중확증출700 bp P30기인편단,성공구건중조질립pET28b/ROP2-P30,해질립경PCR화매절감정,여예기결과일치,병재대장애희균중고효표체,산생상대분자질량(Mr)약위69 000적중조목적단백.결론궁형충ROP2화P301융합기인극륭성공,병표체출예기적복합중조단백ROP2-P30.
