细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
6期
672-675
,共4页
β2微球蛋白%启动子%IFN-γ
β2微毬蛋白%啟動子%IFN-γ
β2미구단백%계동자%IFN-γ
目的: 克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性.方法: 用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子.通过基因重组的方法, 构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体, 然后分别瞬时和稳定转染P815细胞.通过 RT PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析, 观察IFN-γ作用前后EGFP的表达.结果: 从基因组内扩增出302 bp的人β2m基因的启动子, 成功地构建了含此启动子的真核报告载体.RTPCR的结果表明, IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用, 且呈浓度依赖性.流式细胞术的结果显示,在5×10 5 U/L IFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异, 但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍.结论: 人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性.通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达.
目的: 剋隆人β2微毬蛋白(β2m)基因啟動子,併研究其在小鼠肥大細胞瘤細胞P815中對下遊報告基因的啟動活性.方法: 用PCR法從基因組內擴增β2m基因啟動子.通過基因重組的方法, 構建含此啟動子的EGFP基因真覈錶達載體, 然後分彆瞬時和穩定轉染P815細胞.通過 RT PCR、熒光顯微鏡攝像和流式細胞術分析, 觀察IFN-γ作用前後EGFP的錶達.結果: 從基因組內擴增齣302 bp的人β2m基因的啟動子, 成功地構建瞭含此啟動子的真覈報告載體.RTPCR的結果錶明, IFN-γ對啟動子的活性具有誘導作用, 且呈濃度依賴性.流式細胞術的結果顯示,在5×10 5 U/L IFN-γ作用下,儘管錶達EGFP的細胞數量沒有差異, 但刺激組EGFP的錶達彊度是未刺激組的2倍.結論: 人β2m基因啟動子在小鼠肥大細胞瘤細胞P815中具有高度的啟動活性.通過該啟動子中所含榦擾素刺激反應元件(ISRE),可在IFN-γ誘導作用下調控下遊目的基因的錶達.
목적: 극륭인β2미구단백(β2m)기인계동자,병연구기재소서비대세포류세포P815중대하유보고기인적계동활성.방법: 용PCR법종기인조내확증β2m기인계동자.통과기인중조적방법, 구건함차계동자적EGFP기인진핵표체재체, 연후분별순시화은정전염P815세포.통과 RT PCR、형광현미경섭상화류식세포술분석, 관찰IFN-γ작용전후EGFP적표체.결과: 종기인조내확증출302 bp적인β2m기인적계동자, 성공지구건료함차계동자적진핵보고재체.RTPCR적결과표명, IFN-γ대계동자적활성구유유도작용, 차정농도의뢰성.류식세포술적결과현시,재5×10 5 U/L IFN-γ작용하,진관표체EGFP적세포수량몰유차이, 단자격조EGFP적표체강도시미자격조적2배.결론: 인β2m기인계동자재소서비대세포류세포P815중구유고도적계동활성.통과해계동자중소함간우소자격반응원건(ISRE),가재IFN-γ유도작용하조공하유목적기인적표체.
