中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
2期
165-168
,共4页
细胞周期蛋白E%反义RNA%乳腺癌%抑制作用
細胞週期蛋白E%反義RNA%乳腺癌%抑製作用
세포주기단백E%반의RNA%유선암%억제작용
为了探讨细胞周期蛋白E(cyclin E)与人乳腺癌细胞恶性特征间的相关性,利用反义RNA抑制基因表达的技术,构建了细胞周期蛋白E反义RNA的真核表达载体并转入人乳腺癌细胞中.通过G418筛选出阳性克隆,经PCR和Western印迹检测,确定细胞中含有重组质粒,并且细胞周期蛋白E蛋白的水平明显降低,由此获得了反义RNA表达载体导致的细胞周期蛋白E表达受抑制的细胞.细胞模型建立后,观察分析了细胞形态,细胞生长的血清依赖性以及软琼脂成集落能力,与对照细胞相比所发生的变化.结果显示,细胞周期蛋白E受抑制后,乳腺癌细胞体积变大,细胞生长对血清依赖性增加,低血清培养到第6 d时,细胞密度约为对照细胞的五分之一,细胞成集落能力也显著下降,软琼脂中克隆形成率下降57%.这些变化都表明乳腺癌细胞恶性程度由于细胞周期蛋白E表达受抑制而减弱,可以推测cyclinE与乳腺癌细胞的恶性增殖及非锚定依赖性生长有着明显的关系.
為瞭探討細胞週期蛋白E(cyclin E)與人乳腺癌細胞噁性特徵間的相關性,利用反義RNA抑製基因錶達的技術,構建瞭細胞週期蛋白E反義RNA的真覈錶達載體併轉入人乳腺癌細胞中.通過G418篩選齣暘性剋隆,經PCR和Western印跡檢測,確定細胞中含有重組質粒,併且細胞週期蛋白E蛋白的水平明顯降低,由此穫得瞭反義RNA錶達載體導緻的細胞週期蛋白E錶達受抑製的細胞.細胞模型建立後,觀察分析瞭細胞形態,細胞生長的血清依賴性以及軟瓊脂成集落能力,與對照細胞相比所髮生的變化.結果顯示,細胞週期蛋白E受抑製後,乳腺癌細胞體積變大,細胞生長對血清依賴性增加,低血清培養到第6 d時,細胞密度約為對照細胞的五分之一,細胞成集落能力也顯著下降,軟瓊脂中剋隆形成率下降57%.這些變化都錶明乳腺癌細胞噁性程度由于細胞週期蛋白E錶達受抑製而減弱,可以推測cyclinE與乳腺癌細胞的噁性增殖及非錨定依賴性生長有著明顯的關繫.
위료탐토세포주기단백E(cyclin E)여인유선암세포악성특정간적상관성,이용반의RNA억제기인표체적기술,구건료세포주기단백E반의RNA적진핵표체재체병전입인유선암세포중.통과G418사선출양성극륭,경PCR화Western인적검측,학정세포중함유중조질립,병차세포주기단백E단백적수평명현강저,유차획득료반의RNA표체재체도치적세포주기단백E표체수억제적세포.세포모형건립후,관찰분석료세포형태,세포생장적혈청의뢰성이급연경지성집락능력,여대조세포상비소발생적변화.결과현시,세포주기단백E수억제후,유선암세포체적변대,세포생장대혈청의뢰성증가,저혈청배양도제6 d시,세포밀도약위대조세포적오분지일,세포성집락능력야현저하강,연경지중극륭형성솔하강57%.저사변화도표명유선암세포악성정도유우세포주기단백E표체수억제이감약,가이추측cyclinE여유선암세포적악성증식급비묘정의뢰성생장유착명현적관계.
