生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2001年
3期
171-174
,共4页
王敦成%张晓东%王建安%赖春宁%黎燕%沈倍奋
王敦成%張曉東%王建安%賴春寧%黎燕%瀋倍奮
왕돈성%장효동%왕건안%뢰춘저%려연%침배강
反义RNA%红细胞分化%蛋白激酶C-α%信号转导%γ-珠蛋白
反義RNA%紅細胞分化%蛋白激酶C-α%信號轉導%γ-珠蛋白
반의RNA%홍세포분화%단백격매C-α%신호전도%γ-주단백
为了研究通过功能筛选得到的一个新的红细胞分化相关的全长cDNA(命名为EDRFI)的功能,选择K562细胞作为模型细胞来观察反义EDRFI表达对细胞功能的影响.通过快速构建,同时得到了正向和反向插入片段的真核表达载体pcDNA3-EDRFI-S(sense)及peDNA3-AS(antisense),并通过改进的LipofectAMINE细胞转染和G418筛选,得到了稳定表达的细胞株,进行基因组PCR鉴定,证明了转染的高效性.Norrhem B10t试验的结果表明,反义载体转染的K562细胞中,EDRF1在mRNA表达水平上受到下调,提示EDRF1反义DNA的表达可能抑制了EDRF1mRNA的正常转录.进一步,γ-珠蛋白和PKC-α的表达在反义构建质粒转染K562细胞中的表达均受到下调,这可能传递了红细胞分化的负反馈信号,从而抑制了珠蛋白的合成.
為瞭研究通過功能篩選得到的一箇新的紅細胞分化相關的全長cDNA(命名為EDRFI)的功能,選擇K562細胞作為模型細胞來觀察反義EDRFI錶達對細胞功能的影響.通過快速構建,同時得到瞭正嚮和反嚮插入片段的真覈錶達載體pcDNA3-EDRFI-S(sense)及peDNA3-AS(antisense),併通過改進的LipofectAMINE細胞轉染和G418篩選,得到瞭穩定錶達的細胞株,進行基因組PCR鑒定,證明瞭轉染的高效性.Norrhem B10t試驗的結果錶明,反義載體轉染的K562細胞中,EDRF1在mRNA錶達水平上受到下調,提示EDRF1反義DNA的錶達可能抑製瞭EDRF1mRNA的正常轉錄.進一步,γ-珠蛋白和PKC-α的錶達在反義構建質粒轉染K562細胞中的錶達均受到下調,這可能傳遞瞭紅細胞分化的負反饋信號,從而抑製瞭珠蛋白的閤成.
위료연구통과공능사선득도적일개신적홍세포분화상관적전장cDNA(명명위EDRFI)적공능,선택K562세포작위모형세포래관찰반의EDRFI표체대세포공능적영향.통과쾌속구건,동시득도료정향화반향삽입편단적진핵표체재체pcDNA3-EDRFI-S(sense)급peDNA3-AS(antisense),병통과개진적LipofectAMINE세포전염화G418사선,득도료은정표체적세포주,진행기인조PCR감정,증명료전염적고효성.Norrhem B10t시험적결과표명,반의재체전염적K562세포중,EDRF1재mRNA표체수평상수도하조,제시EDRF1반의DNA적표체가능억제료EDRF1mRNA적정상전록.진일보,γ-주단백화PKC-α적표체재반의구건질립전염K562세포중적표체균수도하조,저가능전체료홍세포분화적부반궤신호,종이억제료주단백적합성.
