生物工程进展
生物工程進展
생물공정진전
PROGRESS IN BIOTECHNOLOGY
2000年
6期
63-67
,共5页
苏勇%易进华%李军%谭靖伟%王海波
囌勇%易進華%李軍%譚靖偉%王海波
소용%역진화%리군%담정위%왕해파
组织型纤溶酶原激活物%硫氧化还原蛋白%大肠杆菌
組織型纖溶酶原激活物%硫氧化還原蛋白%大腸桿菌
조직형섬용매원격활물%류양화환원단백%대장간균
目的:克隆含tPA中355个氨基酸密码子(1-3和176-527氨基酸)的cDNA序列(tPA355),将其在大肠杆茵融合蛋白表达系统中表达,并在体外复性使其具有激活纤溶酶原的生物活性.方法:采用RT-PCR技术从人黑色素瘤细胞Bowes中克隆出tPA355 cDNA,然后在pET32a(+)BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中表达,将表达出的融合蛋白Trx-tPA355(Thioredoxin,Trx)包涵体在体外进行变性、复性和纯化以使其具有激活纤溶酶原的生物活性.结果:测序结果表明本研究克隆的编码tPA中355个氨基酸密码子的cDNA序列与美国专利(公开号:5,587,159)中对应的序列完全一致,将其在pET32a(+)/BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中表达可获得稳定表达的融合蛋白Trx-tPA355包涵体,该包涵体占菌体总蛋白的30%左右,此融合蛋白经变性、复性后具有激活纤溶酶原的生物活性.结论:含tPA中355个氨基酸密码子(1-3和176-527氨基酸)的cDNA在大肠杆茵TrX融合蛋白表达系统中可获得稳定表达,表达的融合蛋白产物在体外经变性、复性后具有激活纤溶酶原的生物活性.
目的:剋隆含tPA中355箇氨基痠密碼子(1-3和176-527氨基痠)的cDNA序列(tPA355),將其在大腸桿茵融閤蛋白錶達繫統中錶達,併在體外複性使其具有激活纖溶酶原的生物活性.方法:採用RT-PCR技術從人黑色素瘤細胞Bowes中剋隆齣tPA355 cDNA,然後在pET32a(+)BL21(DE3)大腸桿菌錶達繫統中錶達,將錶達齣的融閤蛋白Trx-tPA355(Thioredoxin,Trx)包涵體在體外進行變性、複性和純化以使其具有激活纖溶酶原的生物活性.結果:測序結果錶明本研究剋隆的編碼tPA中355箇氨基痠密碼子的cDNA序列與美國專利(公開號:5,587,159)中對應的序列完全一緻,將其在pET32a(+)/BL21(DE3)大腸桿菌錶達繫統中錶達可穫得穩定錶達的融閤蛋白Trx-tPA355包涵體,該包涵體佔菌體總蛋白的30%左右,此融閤蛋白經變性、複性後具有激活纖溶酶原的生物活性.結論:含tPA中355箇氨基痠密碼子(1-3和176-527氨基痠)的cDNA在大腸桿茵TrX融閤蛋白錶達繫統中可穫得穩定錶達,錶達的融閤蛋白產物在體外經變性、複性後具有激活纖溶酶原的生物活性.
목적:극륭함tPA중355개안기산밀마자(1-3화176-527안기산)적cDNA서렬(tPA355),장기재대장간인융합단백표체계통중표체,병재체외복성사기구유격활섬용매원적생물활성.방법:채용RT-PCR기술종인흑색소류세포Bowes중극륭출tPA355 cDNA,연후재pET32a(+)BL21(DE3)대장간균표체계통중표체,장표체출적융합단백Trx-tPA355(Thioredoxin,Trx)포함체재체외진행변성、복성화순화이사기구유격활섬용매원적생물활성.결과:측서결과표명본연구극륭적편마tPA중355개안기산밀마자적cDNA서렬여미국전리(공개호:5,587,159)중대응적서렬완전일치,장기재pET32a(+)/BL21(DE3)대장간균표체계통중표체가획득은정표체적융합단백Trx-tPA355포함체,해포함체점균체총단백적30%좌우,차융합단백경변성、복성후구유격활섬용매원적생물활성.결론:함tPA중355개안기산밀마자(1-3화176-527안기산)적cDNA재대장간인TrX융합단백표체계통중가획득은정표체,표체적융합단백산물재체외경변성、복성후구유격활섬용매원적생물활성.
