细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2003年
1期
62-64,67
,共4页
白银%王琰%张海荣%周丽君%吕英谦%俞莉章
白銀%王琰%張海榮%週麗君%呂英謙%俞莉章
백은%왕염%장해영%주려군%려영겸%유리장
嵌合抗体%二氢叶酸还原酶%CHO细胞%真核表达
嵌閤抗體%二氫葉痠還原酶%CHO細胞%真覈錶達
감합항체%이경협산환원매%CHO세포%진핵표체
目的: 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR )中表达的产量.方法: 对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后, 构建不同的嵌合抗体表达载体.用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选, 用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平.结果: 通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变, 使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化.转染CHO细胞后, 可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果, 抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关.从弱化程度最高的pWS2-BDI组中, 我们筛选得到表达量达55 μg/(106细胞*24 h)的高表达细胞株, 经锌离子进一步诱导后, 表达量可达100 μg/(106细胞*24 h)以上.结论: 弱化表达载体中DHFR的表达, 可提高MTX对工程抗体表达的增加效果.
目的: 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌閤抗體在二氫葉痠還原酶缺陷的CHO細胞株(CHO/DHFR )中錶達的產量.方法: 對錶達載體中DHFR基因錶達調控序列進行一繫列的刪除突變和點突變後, 構建不同的嵌閤抗體錶達載體.用這些載體轉染CHO細胞併以遞增量的氨甲喋呤(MTX)篩選, 用ELISA法測定每箇加壓水平的各組細胞中抗體的錶達水平.結果: 通過對錶達載體中DHFR基因錶達調控序列的突變, 使DHFR的基礎錶達水平產生瞭不同程度的弱化.轉染CHO細胞後, 可明顯提高MTX加壓增加抗體錶達的效果, 抗體錶達水平的增加基本與DHFR基因的弱化程度呈正相關.從弱化程度最高的pWS2-BDI組中, 我們篩選得到錶達量達55 μg/(106細胞*24 h)的高錶達細胞株, 經鋅離子進一步誘導後, 錶達量可達100 μg/(106細胞*24 h)以上.結論: 弱化錶達載體中DHFR的錶達, 可提高MTX對工程抗體錶達的增加效果.
목적: 제고항인방광암인-서감합항체재이경협산환원매결함적CHO세포주(CHO/DHFR )중표체적산량.방법: 대표체재체중DHFR기인표체조공서렬진행일계렬적산제돌변화점돌변후, 구건불동적감합항체표체재체.용저사재체전염CHO세포병이체증량적안갑첩령(MTX)사선, 용ELISA법측정매개가압수평적각조세포중항체적표체수평.결과: 통과대표체재체중DHFR기인표체조공서렬적돌변, 사DHFR적기출표체수평산생료불동정도적약화.전염CHO세포후, 가명현제고MTX가압증가항체표체적효과, 항체표체수평적증가기본여DHFR기인적약화정도정정상관.종약화정도최고적pWS2-BDI조중, 아문사선득도표체량체55 μg/(106세포*24 h)적고표체세포주, 경자리자진일보유도후, 표체량가체100 μg/(106세포*24 h)이상.결론: 약화표체재체중DHFR적표체, 가제고MTX대공정항체표체적증가효과.
