中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2003年
1期
1-5，59
,共6页
Avermectin%C5-O-甲基转移酶%基因置换%接合转移
Avermectin%C5-O-甲基轉移酶%基因置換%接閤轉移
Avermectin%C5-O-갑기전이매%기인치환%접합전이
C5-O-甲基转移酶基因(aveD)位于阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)染色体3.4kb BamHI的片段上,通过构建avermectin基因组约3.4kb BamHI片段的亚基因文库,用PCR的方法获得该基因的连锁基因C5-酮基还原酶基因(aveF),并作为探针筛出aveD的克隆子.测序后和GenBank做同源比较,结果一致.构建基因置换穿梭载体pHJ5803(pHZ1358::aveD & Amr),通过ET12567::pUZ8002属间接合转移导入S.avermitilis.放松培养后筛选出双交换重组菌株,并用PCR验证重组菌株的aveD已经破坏,将重组菌株摇瓶发酵液提取avermectin进行色谱质谱联机分析,发现重组菌株仅产生4个组分,与出发菌株的4个B组分完全一致.
C5-O-甲基轉移酶基因(aveD)位于阿維鏈黴菌(Streptomyces avermitilis)染色體3.4kb BamHI的片段上,通過構建avermectin基因組約3.4kb BamHI片段的亞基因文庫,用PCR的方法穫得該基因的連鎖基因C5-酮基還原酶基因(aveF),併作為探針篩齣aveD的剋隆子.測序後和GenBank做同源比較,結果一緻.構建基因置換穿梭載體pHJ5803(pHZ1358::aveD & Amr),通過ET12567::pUZ8002屬間接閤轉移導入S.avermitilis.放鬆培養後篩選齣雙交換重組菌株,併用PCR驗證重組菌株的aveD已經破壞,將重組菌株搖瓶髮酵液提取avermectin進行色譜質譜聯機分析,髮現重組菌株僅產生4箇組分,與齣髮菌株的4箇B組分完全一緻.
C5-O-갑기전이매기인(aveD)위우아유련매균(Streptomyces avermitilis)염색체3.4kb BamHI적편단상,통과구건avermectin기인조약3.4kb BamHI편단적아기인문고,용PCR적방법획득해기인적련쇄기인C5-동기환원매기인(aveF),병작위탐침사출aveD적극륭자.측서후화GenBank주동원비교,결과일치.구건기인치환천사재체pHJ5803(pHZ1358::aveD & Amr),통과ET12567::pUZ8002속간접합전이도입S.avermitilis.방송배양후사선출쌍교환중조균주,병용PCR험증중조균주적aveD이경파배,장중조균주요병발효액제취avermectin진행색보질보련궤분석,발현중조균주부산생4개조분,여출발균주적4개B조분완전일치.
