第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2002年
5期
494-497
,共4页
贾凤岐%王维锋%江小玲%杨庆%卫立辛%杨广顺%吴孟超
賈鳳岐%王維鋒%江小玲%楊慶%衛立辛%楊廣順%吳孟超
가봉기%왕유봉%강소령%양경%위립신%양엄순%오맹초
肝肿瘤%MIP1-α%腺病毒载体%细菌同源重组系统
肝腫瘤%MIP1-α%腺病毒載體%細菌同源重組繫統
간종류%MIP1-α%선병독재체%세균동원중조계통
目的:构建小鼠趋化因子MIP1-α(mMIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达,为肝癌基因治疗提供实验基础.方法:PCR扩增含有mMIP1-α的质粒,将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pTrack-CMV- mMIP1-α共转化BJ5183受体菌并在其中发生同源重组,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子,重组腺病毒质粒经过293细胞的包装、扩增和纯化后,感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,一步法提取细胞总RNA,RT-PCR检测mMIP1-α的mRNA.琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中mMIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性.结果:得到了携带mMIP1-α的重组腺病毒,纯化后滴度为4×1011 efu/ml,在感染后的Hepa1-6细胞中检测到mMIP1-α的表达,上清中mMIP1-α的趋化指数为6.3.结论:成功地构建了携带mMIP1-α的重组腺病毒载体,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础.
目的:構建小鼠趨化因子MIP1-α(mMIP1-α)的重組腺病毒載體併在小鼠肝癌細胞中錶達,為肝癌基因治療提供實驗基礎.方法:PCR擴增含有mMIP1-α的質粒,將腺病毒骨架質粒pAdEasy-1以及線性化的重組穿梭質粒pTrack-CMV- mMIP1-α共轉化BJ5183受體菌併在其中髮生同源重組,利用重組前後抗性的改變篩選齣重組子,重組腺病毒質粒經過293細胞的包裝、擴增和純化後,感染小鼠肝癌細胞株Hepa1-6,一步法提取細胞總RNA,RT-PCR檢測mMIP1-α的mRNA.瓊脂糖凝膠打孔法體外觀察感染上清中mMIP1-α對小鼠脾細胞的趨化活性.結果:得到瞭攜帶mMIP1-α的重組腺病毒,純化後滴度為4×1011 efu/ml,在感染後的Hepa1-6細胞中檢測到mMIP1-α的錶達,上清中mMIP1-α的趨化指數為6.3.結論:成功地構建瞭攜帶mMIP1-α的重組腺病毒載體,為下一步應用于肝癌的基因治療提供瞭基礎.
목적:구건소서추화인자MIP1-α(mMIP1-α)적중조선병독재체병재소서간암세포중표체,위간암기인치료제공실험기출.방법:PCR확증함유mMIP1-α적질립,장선병독골가질립pAdEasy-1이급선성화적중조천사질립pTrack-CMV- mMIP1-α공전화BJ5183수체균병재기중발생동원중조,이용중조전후항성적개변사선출중조자,중조선병독질립경과293세포적포장、확증화순화후,감염소서간암세포주Hepa1-6,일보법제취세포총RNA,RT-PCR검측mMIP1-α적mRNA.경지당응효타공법체외관찰감염상청중mMIP1-α대소서비세포적추화활성.결과:득도료휴대mMIP1-α적중조선병독,순화후적도위4×1011 efu/ml,재감염후적Hepa1-6세포중검측도mMIP1-α적표체,상청중mMIP1-α적추화지수위6.3.결론:성공지구건료휴대mMIP1-α적중조선병독재체,위하일보응용우간암적기인치료제공료기출.
