中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2001年
6期
505-512
,共8页
邱全胜%王泽宙%蔡起贵%姜荣锡
邱全勝%王澤宙%蔡起貴%薑榮錫
구전성%왕택주%채기귀%강영석
猕猴桃悬浮细胞 渗透胁迫 脱水蛋白DHN1 绿色荧光蛋白(GFP) 瞬时表达 亚细胞分布 ABA
獼猴桃懸浮細胞 滲透脅迫 脫水蛋白DHN1 綠色熒光蛋白(GFP) 瞬時錶達 亞細胞分佈 ABA
미후도현부세포 삼투협박 탈수단백DHN1 록색형광단백(GFP) 순시표체 아세포분포 ABA
以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子,通过构建DHN1-mGFP4融合蛋白表达载体,研究了渗透胁迫条件下脱水蛋白DHN1的表达及其亚细胞分布的动态变化.采用PCR方法在脱水蛋白基因dhn1两端引入Xba I和BamH I限制性内切酶位点,克隆到质粒pBIN-35S mGFP4,构建DHN1-mGFP4融合蛋白表达载体,并采用基因枪转化猕猴桃(A.delicisoa)悬浮细胞.培养10h后观察到高效表达的GFP绿色荧光,绿色荧光只出现在细胞核内.提高培养介质渗透势后,可以诱导脱水蛋白向细胞质分布(主要集中在质膜周围),并且增加介质渗透势可以明显缩短细胞质出现绿色荧光的时间.蛋白合成抑制剂环己亚胺能够抑制细胞质绿色荧光的出现,暗示细胞质出现的脱水蛋白是诱导产生的结果.ABA可以明显促进细胞质绿色荧光的出现,并且随着介质渗透势的升高迅速缩短细胞质绿色荧光的出现时间.
以綠色熒光蛋白(GFP)為報告分子,通過構建DHN1-mGFP4融閤蛋白錶達載體,研究瞭滲透脅迫條件下脫水蛋白DHN1的錶達及其亞細胞分佈的動態變化.採用PCR方法在脫水蛋白基因dhn1兩耑引入Xba I和BamH I限製性內切酶位點,剋隆到質粒pBIN-35S mGFP4,構建DHN1-mGFP4融閤蛋白錶達載體,併採用基因鎗轉化獼猴桃(A.delicisoa)懸浮細胞.培養10h後觀察到高效錶達的GFP綠色熒光,綠色熒光隻齣現在細胞覈內.提高培養介質滲透勢後,可以誘導脫水蛋白嚮細胞質分佈(主要集中在質膜週圍),併且增加介質滲透勢可以明顯縮短細胞質齣現綠色熒光的時間.蛋白閤成抑製劑環己亞胺能夠抑製細胞質綠色熒光的齣現,暗示細胞質齣現的脫水蛋白是誘導產生的結果.ABA可以明顯促進細胞質綠色熒光的齣現,併且隨著介質滲透勢的升高迅速縮短細胞質綠色熒光的齣現時間.
이록색형광단백(GFP)위보고분자,통과구건DHN1-mGFP4융합단백표체재체,연구료삼투협박조건하탈수단백DHN1적표체급기아세포분포적동태변화.채용PCR방법재탈수단백기인dhn1량단인입Xba I화BamH I한제성내절매위점,극륭도질립pBIN-35S mGFP4,구건DHN1-mGFP4융합단백표체재체,병채용기인창전화미후도(A.delicisoa)현부세포.배양10h후관찰도고효표체적GFP록색형광,록색형광지출현재세포핵내.제고배양개질삼투세후,가이유도탈수단백향세포질분포(주요집중재질막주위),병차증가개질삼투세가이명현축단세포질출현록색형광적시간.단백합성억제제배기아알능구억제세포질록색형광적출현,암시세포질출현적탈수단백시유도산생적결과.ABA가이명현촉진세포질록색형광적출현,병차수착개질삼투세적승고신속축단세포질록색형광적출현시간.
