上海口腔医学
上海口腔醫學
상해구강의학
SHANGHAI JOURNAL OF STOMATOLOGY
2005年
5期
479-484
,共6页
刘浩%姜广水%卞继峰%刘贤锡%孙继军%王晓华
劉浩%薑廣水%卞繼峰%劉賢錫%孫繼軍%王曉華
류호%강엄수%변계봉%류현석%손계군%왕효화
DNA疫苗%减毒沙门氏菌%龋病%变形链球菌
DNA疫苗%減毒沙門氏菌%齲病%變形鏈毬菌
DNA역묘%감독사문씨균%우병%변형련구균
目的:构建含有编码变形链球菌致龋毒力因子SBR基因的双启动子防龋DNA疫苗pCN-SSIE,以减毒沙门菌为载体进行高效黏膜免疫.方法:通过PCR扩增编码变形链球菌表面蛋白抗原的唾液结合区段(SBR)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,将SBR基因插入到双启动子表达载体pCMVnir中,在SBR基因上游和下游依次插入人工合成的tPA信号肽基因序列、核糖体内部进入位点(IRES)基因和EGFP基因,构建质粒pCN-SSIE.通过DNA测序和酶切分析证明,双启动子表达质粒pCN-SSIE构建成功后,再用该质粒转化减毒沙门菌SL3261和转染CHO细胞,检测SBR在原核细胞和真核细胞中的表达状况,最后用pCN-SSIE裸质粒通过肌内注射免疫小鼠,检测其血清中的抗SBR特异抗体.结果:DNA测序和酶切分析均证明,构建的双启动子表达质粒pCN-SSIE开放读码框架正确;质粒在原核和真核细胞中均能正常表达;在免疫小鼠的血清中检测到了高水平的抗SBR特异IgG.结论:构建成功双启动子表达质粒pCN-SSIE,在体外真核和原核细胞中均能正常表达,用其作为DNA疫苗免疫动物,可诱导明显的免疫应答.
目的:構建含有編碼變形鏈毬菌緻齲毒力因子SBR基因的雙啟動子防齲DNA疫苗pCN-SSIE,以減毒沙門菌為載體進行高效黏膜免疫.方法:通過PCR擴增編碼變形鏈毬菌錶麵蛋白抗原的唾液結閤區段(SBR)基因和增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因,將SBR基因插入到雙啟動子錶達載體pCMVnir中,在SBR基因上遊和下遊依次插入人工閤成的tPA信號肽基因序列、覈糖體內部進入位點(IRES)基因和EGFP基因,構建質粒pCN-SSIE.通過DNA測序和酶切分析證明,雙啟動子錶達質粒pCN-SSIE構建成功後,再用該質粒轉化減毒沙門菌SL3261和轉染CHO細胞,檢測SBR在原覈細胞和真覈細胞中的錶達狀況,最後用pCN-SSIE裸質粒通過肌內註射免疫小鼠,檢測其血清中的抗SBR特異抗體.結果:DNA測序和酶切分析均證明,構建的雙啟動子錶達質粒pCN-SSIE開放讀碼框架正確;質粒在原覈和真覈細胞中均能正常錶達;在免疫小鼠的血清中檢測到瞭高水平的抗SBR特異IgG.結論:構建成功雙啟動子錶達質粒pCN-SSIE,在體外真覈和原覈細胞中均能正常錶達,用其作為DNA疫苗免疫動物,可誘導明顯的免疫應答.
목적:구건함유편마변형련구균치우독력인자SBR기인적쌍계동자방우DNA역묘pCN-SSIE,이감독사문균위재체진행고효점막면역.방법:통과PCR확증편마변형련구균표면단백항원적타액결합구단(SBR)기인화증강형록색형광단백(EGFP)기인,장SBR기인삽입도쌍계동자표체재체pCMVnir중,재SBR기인상유화하유의차삽입인공합성적tPA신호태기인서렬、핵당체내부진입위점(IRES)기인화EGFP기인,구건질립pCN-SSIE.통과DNA측서화매절분석증명,쌍계동자표체질립pCN-SSIE구건성공후,재용해질립전화감독사문균SL3261화전염CHO세포,검측SBR재원핵세포화진핵세포중적표체상황,최후용pCN-SSIE라질립통과기내주사면역소서,검측기혈청중적항SBR특이항체.결과:DNA측서화매절분석균증명,구건적쌍계동자표체질립pCN-SSIE개방독마광가정학;질립재원핵화진핵세포중균능정상표체;재면역소서적혈청중검측도료고수평적항SBR특이IgG.결론:구건성공쌍계동자표체질립pCN-SSIE,재체외진핵화원핵세포중균능정상표체,용기작위DNA역묘면역동물,가유도명현적면역응답.
