霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析
곽란독소B아단위여이도소B련융합기인적극륭급원핵표체분석
Cloning of CTB-INSB Fusion Gene and its Expression in E. coli
  • 万方数据
    中国生物工程杂志 중국생물공정잡지
    JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
    2005年 4期 56-61 ,共6页

    陈丽%欧阳凤秀%钱炳俊%任宏%王强%姜庆五%王玉炯%刘静波%梁婉琪%潘爱虎

    진려%구양봉수%전병준%임굉%왕강%강경오%왕옥형%류정파%량완기%반애호

    霍乱毒素B亚单位%胰岛素B链%融合基因CTB-INSB%原核表达%神经节苷脂%GMl 霍亂毒素B亞單位%胰島素B鏈%融閤基因CTB-INSB%原覈錶達%神經節苷脂%GMl
    곽란독소B아단위%이도소B련%융합기인CTB-INSB%원핵표체%신경절감지%GMl
    构建了霍乱毒素B亚单位(oholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15%SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的30%.含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构.Westernblotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性.同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的高级结构,具有生物活性.
    구건료곽란독소B아단위(oholera toxin B subunit,CTB)여이도소(insulin)B련적융합기인CTB-INSB,장해융합기인극륭도대장간균표체재체pET-30a(+)중,획득중조질립pETCIB;병장해질립전입대장간균균주BL21(DE3)중;중조균주경IPTG유도후적표체산물경15%SDS-PAGE분석표명가이표체융합단백,기분자량약위15.4kDa,차주요이포함체형식존재,약점전균단백적30%.함CTB-INSB중조단백적포함체경변성화복성후,가재체외자조장성오취체결구.Westernblotting분석결과현시CTB-INSB가분별피곽란독소적항체화이도소적항체식별,표명해단백구유곽란독소B아단위여이도소적쌍중항원성.동시GM1-ELISA분석결과표명CTB-INSB재체외가여신경절감지GM1(monosialoganglioside)특이결합,진일보증실료타능구형성유사CTB오취체적고급결구,구유생물활성.
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