CAJ | 학술논문

目的:通过一种能够在细胞内表达短发卡RNA的逆转录病毒载体来研究RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的影响.方法:首先针对HBV基因组Pol基因RT区寻找RNAi的靶位,并设计相对应的寡核苷酸链.然后再将一对碱基配对寡核苷酸链退火后连接入载体形成重组的质粒,并进行鉴定.在Huh-7细胞中,将通过鉴定的干扰质粒与HBV复制型质粒pHBV3.8共转染,分别应用ELISA方法来检测HBV相关的抗原,应用Northern印迹检测HBV RNA,以及应用实时荧光定量PCR和Southern印迹检测HBV核心颗粒DNA.结果:研究通过计算机方法协助寻找了3条RNAi靶位,并且构建了相应的基于逆转录病毒载体的RNA干扰质粒154i、312i和734i.结果发现312i对pHBV3.8表达有明显的抑制,HBsAg和HBeAg分别为阴性对照组的39%和41%,差异均有显著性(P=0.001,P=0.000).定量荧光PCR结果显示312i组核心颗粒DNA水平显著低于阴性对照组(21.3%±1.1% vs100.0%±10.6%,P=0.0046).Southern blot和Northern blot结果均显示,312i组病毒复制及mRNA转录水平最低(10.5%,12.0%).结论:在HBV基因组RT区找到了一个可用于RNAi的靶位,并且构建了相对应的干扰质粒,此质粒可成功地抑制HBV复制型质粒在细胞中的复制和表达.
목적:통과일충능구재세포내표체단발잡RNA적역전록병독재체래연구RNA간우대을형간염병독복제적영향.방법:수선침대HBV기인조Pol기인RT구심조RNAi적파위,병설계상대응적과핵감산련.연후재장일대감기배대과핵감산련퇴화후련접입재체형성중조적질립,병진행감정.재Huh-7세포중,장통과감정적간우질립여HBV복제형질립pHBV3.8공전염,분별응용ELISA방법래검측HBV상관적항원,응용Northern인적검측HBV RNA,이급응용실시형광정량PCR화Southern인적검측HBV핵심과립DNA.결과:연구통과계산궤방법협조심조료3조RNAi파위,병차구건료상응적기우역전록병독재체적RNA간우질립154i、312i화734i.결과발현312i대pHBV3.8표체유명현적억제,HBsAg화HBeAg분별위음성대조조적39%화41%,차이균유현저성(P=0.001,P=0.000).정량형광PCR결과현시312i조핵심과립DNA수평현저저우음성대조조(21.3%±1.1% vs100.0%±10.6%,P=0.0046).Southern blot화Northern blot결과균현시,312i조병독복제급mRNA전록수평최저(10.5%,12.0%).결론:재HBV기인조RT구조도료일개가용우RNAi적파위,병차구건료상대응적간우질립,차질립가성공지억제HBV복제형질립재세포중적복제화표체.