中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
2期
91-96
,共6页
孙晓林%LUO Xue-nong%骆学农%景志忠%王佩雅%才学鹏
孫曉林%LUO Xue-nong%駱學農%景誌忠%王珮雅%纔學鵬
손효림%LUO Xue-nong%락학농%경지충%왕패아%재학붕
猪带绦虫%六钩蚴%TSO45W-4BX抗原%杂交瘤细胞
豬帶縚蟲%六鉤蚴%TSO45W-4BX抗原%雜交瘤細胞
저대조충%륙구유%TSO45W-4BX항원%잡교류세포
为获得针对猪带绦虫六钩蚴(TSO)45W-4BX抗原的杂交瘤细胞株,用IPTG对TS045W-4BX的重组质粒pGEX-4BX进行了诱导表达,并采用Sepharose-4B层析技术对表达产物进行纯化,运用SDS-PAGE和Western-blot分别对其纯度和活性进行了检测.分别用弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂乳化已纯化的猪带绦虫TS045W-4BX重组抗原,随后用其分别免疫BALB/c小鼠3次,检测血清抗体效价呈阳性.之后,再进行加强免疫,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞进行融合,经TS045W-4BX抗原和GST抗原双系统间接ELISA筛选,最终获得了18株抗TS045W-4BX抗原的杂交瘤细胞株.采用有限稀释法对其中的4株进行5次亚克隆,最终获取了4株稳定分泌针对TS045W-4BX抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,金标试纸条法鉴定其抗体亚类均属于IgG1类,轻链为κ型.
為穫得針對豬帶縚蟲六鉤蚴(TSO)45W-4BX抗原的雜交瘤細胞株,用IPTG對TS045W-4BX的重組質粒pGEX-4BX進行瞭誘導錶達,併採用Sepharose-4B層析技術對錶達產物進行純化,運用SDS-PAGE和Western-blot分彆對其純度和活性進行瞭檢測.分彆用弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑乳化已純化的豬帶縚蟲TS045W-4BX重組抗原,隨後用其分彆免疫BALB/c小鼠3次,檢測血清抗體效價呈暘性.之後,再進行加彊免疫,取免疫小鼠脾細胞和SP2/0細胞進行融閤,經TS045W-4BX抗原和GST抗原雙繫統間接ELISA篩選,最終穫得瞭18株抗TS045W-4BX抗原的雜交瘤細胞株.採用有限稀釋法對其中的4株進行5次亞剋隆,最終穫取瞭4株穩定分泌針對TS045W-4BX抗原的單剋隆抗體的雜交瘤細胞株,金標試紙條法鑒定其抗體亞類均屬于IgG1類,輕鏈為κ型.
위획득침대저대조충륙구유(TSO)45W-4BX항원적잡교류세포주,용IPTG대TS045W-4BX적중조질립pGEX-4BX진행료유도표체,병채용Sepharose-4B층석기술대표체산물진행순화,운용SDS-PAGE화Western-blot분별대기순도화활성진행료검측.분별용불씨완전좌제、불씨불완전좌제유화이순화적저대조충TS045W-4BX중조항원,수후용기분별면역BALB/c소서3차,검측혈청항체효개정양성.지후,재진행가강면역,취면역소서비세포화SP2/0세포진행융합,경TS045W-4BX항원화GST항원쌍계통간접ELISA사선,최종획득료18주항TS045W-4BX항원적잡교류세포주.채용유한희석법대기중적4주진행5차아극륭,최종획취료4주은정분비침대TS045W-4BX항원적단극륭항체적잡교류세포주,금표시지조법감정기항체아류균속우IgG1류,경련위κ형.
