CAJ | 학술논문

从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:1D1)中抽提总RNA,采用简并引物,经RT-PCR扩增单抗VH和VL的DNA编码区基因.通过SMART-PCR扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.采用基因重组技术,将单抗VH、VL基因及其相应信号肽序列,与人IgGl的CH基因、Ck链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/1D1.转染293T细胞进行瞬时表达,采用流式细胞术分析,转染上清与L929-CD86基因转染细胞的阳性结合率为97.6%.既而转染CHO细胞,经G418筛选,获取稳定分泌嵌合抗体的基因转染细胞株(CHO-ch1D1).收集无血清培养基的培养上清,采用Protein G亲和层析柱分离纯化,经Lowr法定量.从上清中获取的嵌合抗体蛋白的得率为3.066 mg/L.经进一步间接免疫荧光及流式细胞术分析,纯化嵌合抗体与L929-CD86基因转染细胞,及Daudi细胞膜型CD86分子的阳性结合率分别为98.5%和95.7%.将嵌合抗体(终浓度为5 μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,嵌合抗体对Daudi细胞的生长具有抑制作用(P<0.05).本研究获取的嵌合抗体在CD86分子的基础和应用研究中具有重要的价值.
종분비서항인CD86단극륭항체적잡교류세포주(극륭호:1D1)중추제총RNA,채용간병인물,경RT-PCR확증단항VH화VL적DNA편마구기인.통과SMART-PCR확증VH화VL기인상응적신호태서렬.채용기인중조기술,장단항VH、VL기인급기상응신호태서렬,여인IgGl적CH기인、Ck련기인진행병접,구건인-서감합항체기인적표체질립pIRES/1D1.전염293T세포진행순시표체,채용류식세포술분석,전염상청여L929-CD86기인전염세포적양성결합솔위97.6%.기이전염CHO세포,경G418사선,획취은정분비감합항체적기인전염세포주(CHO-ch1D1).수집무혈청배양기적배양상청,채용Protein G친화층석주분리순화,경Lowr법정량.종상청중획취적감합항체단백적득솔위3.066 mg/L.경진일보간접면역형광급류식세포술분석,순화감합항체여L929-CD86기인전염세포,급Daudi세포막형CD86분자적양성결합솔분별위98.5%화95.7%.장감합항체(종농도위5 μg/ml)가입도Daudi세포적배양체계중,경현미경관찰급MTT법분석,감합항체대Daudi세포적생장구유억제작용(P<0.05).본연구획취적감합항체재CD86분자적기출화응용연구중구유중요적개치.