CAJ | 학술논문

背景与目的 X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员,是IAP家族中最强的凋亡抑制因子,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡.XIAP基因在大多数的肿瘤细胞株中过表达,其表达与肿瘤的进展、复发、预后以及肿瘤化疗的耐药密切相关.研究通过RNAi方法下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NIC-A549的XIAP基因表达后,研究XIAP siRNA特异序列在NSCLC细胞凋亡和化疗敏感性方面的作用.方法应用半定量RT-PCR法检测A549细胞中XIAP mRNA基因的表达,设计并构建XIAP干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达载体,转染siRNA载体至A549中.荧光纤维镜确定转染效率,MTT法测定细胞增殖率及化疗药物对细胞杀伤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果酶切和DNA测序证实XIAP siRNA构建成功.荧光纤维镜显示阳性转染组及阴性转染组的细胞转染效率无差异.半定量RT-PCR法示阳性转染组较阴性转染组、未转染组细胞XIAP mRNA表达明显降低;与对照组相比,顺铂对阳性转染组XIAP mRNA表达的抑制作用明显增强、阳性转染组细胞增殖在24 h、48 h、72 h、96 h明显受抑制;细胞杀伤率、凋亡率明显增加.结论 XIAP基因在NSCLC中表达增高,可抑制NSCLC细胞凋亡,导致NSCLC化疗耐药.XIAP siRNA序列町特异性地抑制NSCLC细胞增长,下调XIAP基因的表达,促进细胞凋亡,增加NSCLC化疗敏感性.XIAP siRNA序列有可能成为NSCLC治疗的靶标.
배경여목적 X련쇄조망억제단백(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)시신발현적일개IAP가족중적주요성원,시IAP가족중최강적조망억제인자,타가직접억제caspases병가다도경조절세포조망.XIAP기인재대다수적종류세포주중과표체,기표체여종류적진전、복발、예후이급종류화료적내약밀절상관.연구통과RNAi방법하조비소세포폐암(NSCLC)세포NIC-A549적XIAP기인표체후,연구XIAP siRNA특이서렬재NSCLC세포조망화화료민감성방면적작용.방법 응용반정량RT-PCR법검측A549세포중XIAP mRNA기인적표체,설계병구건XIAP간우성소RNA(small interfering RNA,siRNA)서렬적표체재체,전염siRNA재체지A549중.형광섬유경학정전염효솔,MTT법측정세포증식솔급화료약물대세포살상솔,류식세포의측정세포조망솔.결과 매절화DNA측서증실XIAP siRNA구건성공.형광섬유경현시양성전염조급음성전염조적세포전염효솔무차이.반정량RT-PCR법시양성전염조교음성전염조、미전염조세포XIAP mRNA표체명현강저;여대조조상비,순박대양성전염조XIAP mRNA표체적억제작용명현증강、양성전염조세포증식재24 h、48 h、72 h、96 h명현수억제;세포살상솔、조망솔명현증가.결론 XIAP기인재NSCLC중표체증고,가억제NSCLC세포조망,도치NSCLC화료내약.XIAP siRNA서렬정특이성지억제NSCLC세포증장,하조XIAP기인적표체,촉진세포조망,증가NSCLC화료민감성.XIAP siRNA서렬유가능성위NSCLC치료적파표.