中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
6期
546-550
,共5页
单小云%胡野%应延风%屠平光
單小雲%鬍野%應延風%屠平光
단소운%호야%응연풍%도평광
嗜肺军团菌%lvgA基因%实时荧光定量RT-PCR
嗜肺軍糰菌%lvgA基因%實時熒光定量RT-PCR
기폐군단균%lvgA기인%실시형광정량RT-PCR
目的 确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR.方法 通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v. 2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域.根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列.根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测.结果 研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面.不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%.在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,最高达4.3倍(P<0.05).基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌.结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断.
目的 確定不同嗜肺軍糰菌lvgA基因序列的差異性及其感染宿主細胞後轉錄水平的變化,建立基于lvgA基因檢測嗜肺軍糰菌的熒光定量RT-PCR.方法 通過使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v. 2.0等網絡資源分析嗜肺軍糰菌lvgA基因編碼蛋白的保守功能結構域、跨膜區域.根據參攷序列設計引物,採用PCR技術從嗜肺軍糰菌基因組DNA中擴增lvgA基因,將其連接入剋隆載體pMD18-T進行測序,併用cltust軟件比較不同嗜肺軍糰菌菌株lvgA基因的覈苷痠、氨基痠序列.根據lvgA基因和嗜肺軍糰菌16SrDNA序列內的特異保守區域設計引物,以實時熒光定量RT-PCR檢測嗜肺軍糰菌在感染人單覈巨噬樣細胞THP-1後lvgA基因轉錄水平的變化,同時,採用基于lvgA基因的熒光定量RT-PCR對嗜肺軍糰菌患者血液樣本進行檢測.結果 研究錶明,嗜肺軍糰菌lvgA基因為軍糰菌毒力基因,其產物定位于外膜錶麵.不同嗜肺軍糰菌菌株中lvgA基因的覈苷痠序列和氨基痠序列保守,相似度分彆達:99%,96%,96%和99%,98%,98%.在感染宿主細胞後lvgA基因的轉錄水平上調明顯,最高達4.3倍(P<0.05).基于lvgA基因的熒光定量RT-PCR方法可有效地檢測嗜肺軍糰菌患者血液樣本中的嗜肺軍糰菌.結論 lvgA基因與嗜肺軍糰菌的毒力相關,建立的基于lvgA基因的熒光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、穩定等優點,適用于嗜肺軍糰菌肺炎臨床實驗室的早期診斷.
목적 학정불동기폐군단균lvgA기인서렬적차이성급기감염숙주세포후전록수평적변화,건립기우lvgA기인검측기폐군단균적형광정량RT-PCR.방법 통과사용NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v. 2.0등망락자원분석기폐군단균lvgA기인편마단백적보수공능결구역、과막구역.근거삼고서렬설계인물,채용PCR기술종기폐군단균기인조DNA중확증lvgA기인,장기련접입극륭재체pMD18-T진행측서,병용cltust연건비교불동기폐군단균균주lvgA기인적핵감산、안기산서렬.근거lvgA기인화기폐군단균16SrDNA서렬내적특이보수구역설계인물,이실시형광정량RT-PCR검측기폐군단균재감염인단핵거서양세포THP-1후lvgA기인전록수평적변화,동시,채용기우lvgA기인적형광정량RT-PCR대기폐군단균환자혈액양본진행검측.결과 연구표명,기폐군단균lvgA기인위군단균독력기인,기산물정위우외막표면.불동기폐군단균균주중lvgA기인적핵감산서렬화안기산서렬보수,상사도분별체:99%,96%,96%화99%,98%,98%.재감염숙주세포후lvgA기인적전록수평상조명현,최고체4.3배(P<0.05).기우lvgA기인적형광정량RT-PCR방법가유효지검측기폐군단균환자혈액양본중적기폐군단균.결론 lvgA기인여기폐군단균적독력상관,건립적기우lvgA기인적형광정량RT-PCR방법구유쾌속、민감、은정등우점,괄용우기폐군단균폐염림상실험실적조기진단.
