中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2010年
11期
835-839
,共5页
正选择克隆载体%链霉菌%小型基因文库%rpsL基因%链霉素
正選擇剋隆載體%鏈黴菌%小型基因文庫%rpsL基因%鏈黴素
정선택극륭재체%련매균%소형기인문고%rpsL기인%련매소
目的 构建链霉菌小型基因文库是获得链霉菌基因的一个重要手段,常规使用的克隆载体常有着一定程度的假阳性,因此构建的高效率的克隆载体有着实际的意义.方法 本研究通过重叠延伸PCR手段将一个96bp的多克隆位点序列插入至rpsL基因的启动子和开放阅读框之间,将此DNA片段克隆至pBluescript KS(-)而获得了新型的正选择克隆载体pLS975.结果 pLS975有18个酶切位点可用于外源DNA片段的克隆,重组克隆以氨苄青霉素抗性和链霉素抗性进行筛选,宿主菌为链霉素抗性菌株如Escherichia coli DH10B.两个小型基因文库的制备显示pLS975具有很高的克隆效率(96%～100%).结论 pLS975可成为构建链霉菌小型基因文库的良好载体.
目的 構建鏈黴菌小型基因文庫是穫得鏈黴菌基因的一箇重要手段,常規使用的剋隆載體常有著一定程度的假暘性,因此構建的高效率的剋隆載體有著實際的意義.方法 本研究通過重疊延伸PCR手段將一箇96bp的多剋隆位點序列插入至rpsL基因的啟動子和開放閱讀框之間,將此DNA片段剋隆至pBluescript KS(-)而穫得瞭新型的正選擇剋隆載體pLS975.結果 pLS975有18箇酶切位點可用于外源DNA片段的剋隆,重組剋隆以氨芐青黴素抗性和鏈黴素抗性進行篩選,宿主菌為鏈黴素抗性菌株如Escherichia coli DH10B.兩箇小型基因文庫的製備顯示pLS975具有很高的剋隆效率(96%～100%).結論 pLS975可成為構建鏈黴菌小型基因文庫的良好載體.
목적 구건련매균소형기인문고시획득련매균기인적일개중요수단,상규사용적극륭재체상유착일정정도적가양성,인차구건적고효솔적극륭재체유착실제적의의.방법 본연구통과중첩연신PCR수단장일개96bp적다극륭위점서렬삽입지rpsL기인적계동자화개방열독광지간,장차DNA편단극륭지pBluescript KS(-)이획득료신형적정선택극륭재체pLS975.결과 pLS975유18개매절위점가용우외원DNA편단적극륭,중조극륭이안변청매소항성화련매소항성진행사선,숙주균위련매소항성균주여Escherichia coli DH10B.량개소형기인문고적제비현시pLS975구유흔고적극륭효솔(96%～100%).결론 pLS975가성위구건련매균소형기인문고적량호재체.
