医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2011年
1期
40-43
,共4页
杨建林%武阳%罗清%陈明清%丁书茂%杨旭
楊建林%武暘%囉清%陳明清%丁書茂%楊旭
양건림%무양%라청%진명청%정서무%양욱
香草素能瞬变受体亚型-1(TRPV1)%HEK293细胞%转染%绿色荧光蛋白
香草素能瞬變受體亞型-1(TRPV1)%HEK293細胞%轉染%綠色熒光蛋白
향초소능순변수체아형-1(TRPV1)%HEK293세포%전염%록색형광단백
目的 构建香草素能瞬变受体亚型-1(TRPV1)膜蛋白稳定表达的细胞系.用于咳嗽与TRPV1关系的研究,以及新型镇咳药物的开发.方法 应用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞,热激转化,将pCDNA3-TRPV1质粒转入到大肠杆菌感受态细胞中扩增,通过聚乙二醇沉淀法纯化质粒,纯化的pCDNA3- TRPV1质粒用磷酸钙转染法转入HEK293细胞.荧光显微镜观察黄绿色荧光蛋白表达;用5μmol/L的CAP处理转染细胞7h,台盼蓝双染色计算细胞病死率,作为细胞表达的证据.结果 经转化并培养后质粒大量扩增,酶切后获得目的 基因片段大小约2650bp,大小符合目的 基因.转染TRPV1的HEK293细胞在荧光显微镜下可清晰观察到黄绿色荧光.使用5μmol/L的辣椒素处理转染后细胞系7h,发现细胞病死率显著上升.结论 TRPV1在HEK293细胞中稳定表达,可用于构建"咳嗽细胞模型".
目的 構建香草素能瞬變受體亞型-1(TRPV1)膜蛋白穩定錶達的細胞繫.用于咳嗽與TRPV1關繫的研究,以及新型鎮咳藥物的開髮.方法 應用CaCl2法製備大腸桿菌感受態細胞,熱激轉化,將pCDNA3-TRPV1質粒轉入到大腸桿菌感受態細胞中擴增,通過聚乙二醇沉澱法純化質粒,純化的pCDNA3- TRPV1質粒用燐痠鈣轉染法轉入HEK293細胞.熒光顯微鏡觀察黃綠色熒光蛋白錶達;用5μmol/L的CAP處理轉染細胞7h,檯盼藍雙染色計算細胞病死率,作為細胞錶達的證據.結果 經轉化併培養後質粒大量擴增,酶切後穫得目的 基因片段大小約2650bp,大小符閤目的 基因.轉染TRPV1的HEK293細胞在熒光顯微鏡下可清晰觀察到黃綠色熒光.使用5μmol/L的辣椒素處理轉染後細胞繫7h,髮現細胞病死率顯著上升.結論 TRPV1在HEK293細胞中穩定錶達,可用于構建"咳嗽細胞模型".
목적 구건향초소능순변수체아형-1(TRPV1)막단백은정표체적세포계.용우해수여TRPV1관계적연구,이급신형진해약물적개발.방법 응용CaCl2법제비대장간균감수태세포,열격전화,장pCDNA3-TRPV1질립전입도대장간균감수태세포중확증,통과취을이순침정법순화질립,순화적pCDNA3- TRPV1질립용린산개전염법전입HEK293세포.형광현미경관찰황록색형광단백표체;용5μmol/L적CAP처리전염세포7h,태반람쌍염색계산세포병사솔,작위세포표체적증거.결과 경전화병배양후질립대량확증,매절후획득목적 기인편단대소약2650bp,대소부합목적 기인.전염TRPV1적HEK293세포재형광현미경하가청석관찰도황록색형광.사용5μmol/L적랄초소처리전염후세포계7h,발현세포병사솔현저상승.결론 TRPV1재HEK293세포중은정표체,가용우구건"해수세포모형".
