CAJ | 학술논문

根据秀丽新杆线虫等其他几种线虫的肌动蛋白(Actin)开放阅读框(ORF)设计简并引物,以捻转血矛线虫总RNA为模板,合成cDNA,用RT-PCR方法扩增出约为1 100bp的DNA片段.将该片段克隆到T载体后进行序列测定和分析,结果表明该基因的ORF为1131bp,与秀丽新杆线虫、新杆状线虫、肿孔古柏线虫等的同源性高达86％以上,推导出其蛋白质序列含有376个氨基酸,与胎生网尾线虫、秀丽新杆线虫、新杆状线虫、马来丝虫等的肌动蛋白相似性均为98％以上,说明成功克隆了捻转血矛线虫actin基因.将捻转血矛线虫肌动蛋白基因的ORF克隆到pET-28a(+)中,构建了原核表达载体,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE分析发现,该基因获得了表达,且以包涵体的形式存在,融合蛋白相对分子质量约46×103.以此重组蛋白为抗原,用自然感染捻转血矛线虫山羊血清为第一抗体进行Westernb blot分析,结果出现1条特异性条带,表明捻转m矛线虫Actin蛋白在自然感染过程中能被宿主的免疫系统识别,可能是一种天然抗原.用纯化重组Actin蛋白免疫小鼠,制备抗血清,以该血清为第一抗体进行Westem blot,结果发现该血清能识别捻转血矛线虫成虫蛋白谱中相对分子质量约为42×103的蛋白条带.将捻转血矛线虫actin基因亚克隆到真核表达载体pVAX1中,构建了DNA疫苗pVAX1-ACT,动物免疫试验结果表明该DNA疫苗在机体内获得了表达.
근거수려신간선충등기타궤충선충적기동단백(Actin)개방열독광(ORF)설계간병인물,이념전혈모선충총RNA위모판,합성cDNA,용RT-PCR방법확증출약위1 100bp적DNA편단.장해편단극륭도T재체후진행서렬측정화분석,결과표명해기인적ORF위1131bp,여수려신간선충、신간상선충、종공고백선충등적동원성고체86％이상,추도출기단백질서렬함유376개안기산,여태생망미선충、수려신간선충、신간상선충、마래사충등적기동단백상사성균위98％이상,설명성공극륭료념전혈모선충actin기인.장념전혈모선충기동단백기인적ORF극륭도pET-28a(+)중,구건료원핵표체재체,용IPTG진행유도표체.SDS-PAGE분석발현,해기인획득료표체,차이포함체적형식존재,융합단백상대분자질량약46×103.이차중조단백위항원,용자연감염념전혈모선충산양혈청위제일항체진행Westernb blot분석,결과출현1조특이성조대,표명념전m모선충Actin단백재자연감염과정중능피숙주적면역계통식별,가능시일충천연항원.용순화중조Actin단백면역소서,제비항혈청,이해혈청위제일항체진행Westem blot,결과발현해혈청능식별념전혈모선충성충단백보중상대분자질량약위42×103적단백조대.장념전혈모선충actin기인아극륭도진핵표체재체pVAX1중,구건료DNA역묘pVAX1-ACT,동물면역시험결과표명해DNA역묘재궤체내획득료표체.