中国医师杂志
中國醫師雜誌
중국의사잡지
JOURNAL OF CHINESE PHYSICIAN
2006年
10期
1310-1312
,共3页
马琼山%文兰%陈利玉%罗敏华%邬国军
馬瓊山%文蘭%陳利玉%囉敏華%鄔國軍
마경산%문란%진리옥%라민화%오국군
巨细胞病毒%外显子%质粒%克隆,分子
巨細胞病毒%外顯子%質粒%剋隆,分子
거세포병독%외현자%질립%극륭,분자
目的 构建和鉴定人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因外显子2,3(ie1-exon2,3)的诱饵质粒,并评价其用于筛选胎儿脑文库的可行性.方法 以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon2,3,克隆入pBT质粒,转化E.coli XL1-Blue MRF'Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒转化入细菌双杂交系统报告菌株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用.结果 在细菌双杂交系统中成功构建了细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie1-exon2,3,并在报告菌株中表达了重组融合蛋白rIE1-N85/λC1,且pBT/ie1-exon2,3无自身激活作用.结论 成功构建了无自激活作用的诱饵质粒pBT/ie1- exon2,3,可用于筛选胎儿脑文库.
目的 構建和鑒定人巨細胞病毒(HCMV)UL123基因外顯子2,3(ie1-exon2,3)的誘餌質粒,併評價其用于篩選胎兒腦文庫的可行性.方法 以重組質粒pTWIN1/ie1為模闆擴增ie1-exon2,3,剋隆入pBT質粒,轉化E.coli XL1-Blue MRF'Kan,經PCR、限製性酶切和測序鑒定暘性重組子,提取暘性重組質粒轉化入細菌雙雜交繫統報告菌株,誘導錶達重組融閤蛋白,用SDS-PAGE和Western Blot對錶達產物進行鑒定,併進一步鑒定重組子自身激活作用.結果 在細菌雙雜交繫統中成功構建瞭細菌雙雜交誘餌質粒pBT/ie1-exon2,3,併在報告菌株中錶達瞭重組融閤蛋白rIE1-N85/λC1,且pBT/ie1-exon2,3無自身激活作用.結論 成功構建瞭無自激活作用的誘餌質粒pBT/ie1- exon2,3,可用于篩選胎兒腦文庫.
목적 구건화감정인거세포병독(HCMV)UL123기인외현자2,3(ie1-exon2,3)적유이질립,병평개기용우사선태인뇌문고적가행성.방법 이중조질립pTWIN1/ie1위모판확증ie1-exon2,3,극륭입pBT질립,전화E.coli XL1-Blue MRF'Kan,경PCR、한제성매절화측서감정양성중조자,제취양성중조질립전화입세균쌍잡교계통보고균주,유도표체중조융합단백,용SDS-PAGE화Western Blot대표체산물진행감정,병진일보감정중조자자신격활작용.결과 재세균쌍잡교계통중성공구건료세균쌍잡교유이질립pBT/ie1-exon2,3,병재보고균주중표체료중조융합단백rIE1-N85/λC1,차pBT/ie1-exon2,3무자신격활작용.결론 성공구건료무자격활작용적유이질립pBT/ie1- exon2,3,가용우사선태인뇌문고.
