神经解剖学杂志
神經解剖學雜誌
신경해부학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROANATOMY
2004年
1期
7-11
,共5页
神经营养素-3%原核表达%亲合层析%真核表达%神经细胞
神經營養素-3%原覈錶達%親閤層析%真覈錶達%神經細胞
신경영양소-3%원핵표체%친합층석%진핵표체%신경세포
为了获取神经营养素-3(NT-3)将之用于神经系统疾病的治疗,采用RT-PCR技术,从人胎脑组织特异性扩增并克隆了人NT-3全长以及成熟蛋白编码基因,将其分别克隆至表达载体pcDNA3.1与pET28a,构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-NT3和重组原核表达载体pET28-NT3s.pcDNA3.1-NT3经脂质体介导转染至大鼠胚胎脑纹状体神经胶质细胞,以G418筛选出抗性阳性克隆,该克隆株与大鼠胚脑纹状体神经干细胞体外共培养5 d,MAP-2(微管相关蛋白2)免疫细胞化学反应结果显示,转染细胞株所表达的NT-3蛋白具有生物学活性,可促进共培养的纹状体神经干细胞的突起生长.将pET28-NT3s转化大肠杆菌,以IPTG诱导,获得了相对分子质量约18 kD的6XHis-NT3融合蛋白,其表达量占菌体总蛋白的20%左右.经镍柱亲和纯化,得到纯度达95%的rhNT-3蛋白,免疫印迹证实所获蛋白产品具有特异的免疫反应性.
為瞭穫取神經營養素-3(NT-3)將之用于神經繫統疾病的治療,採用RT-PCR技術,從人胎腦組織特異性擴增併剋隆瞭人NT-3全長以及成熟蛋白編碼基因,將其分彆剋隆至錶達載體pcDNA3.1與pET28a,構建瞭重組真覈錶達載體pcDNA3.1-NT3和重組原覈錶達載體pET28-NT3s.pcDNA3.1-NT3經脂質體介導轉染至大鼠胚胎腦紋狀體神經膠質細胞,以G418篩選齣抗性暘性剋隆,該剋隆株與大鼠胚腦紋狀體神經榦細胞體外共培養5 d,MAP-2(微管相關蛋白2)免疫細胞化學反應結果顯示,轉染細胞株所錶達的NT-3蛋白具有生物學活性,可促進共培養的紋狀體神經榦細胞的突起生長.將pET28-NT3s轉化大腸桿菌,以IPTG誘導,穫得瞭相對分子質量約18 kD的6XHis-NT3融閤蛋白,其錶達量佔菌體總蛋白的20%左右.經鎳柱親和純化,得到純度達95%的rhNT-3蛋白,免疫印跡證實所穫蛋白產品具有特異的免疫反應性.
위료획취신경영양소-3(NT-3)장지용우신경계통질병적치료,채용RT-PCR기술,종인태뇌조직특이성확증병극륭료인NT-3전장이급성숙단백편마기인,장기분별극륭지표체재체pcDNA3.1여pET28a,구건료중조진핵표체재체pcDNA3.1-NT3화중조원핵표체재체pET28-NT3s.pcDNA3.1-NT3경지질체개도전염지대서배태뇌문상체신경효질세포,이G418사선출항성양성극륭,해극륭주여대서배뇌문상체신경간세포체외공배양5 d,MAP-2(미관상관단백2)면역세포화학반응결과현시,전염세포주소표체적NT-3단백구유생물학활성,가촉진공배양적문상체신경간세포적돌기생장.장pET28-NT3s전화대장간균,이IPTG유도,획득료상대분자질량약18 kD적6XHis-NT3융합단백,기표체량점균체총단백적20%좌우.경얼주친화순화,득도순도체95%적rhNT-3단백,면역인적증실소획단백산품구유특이적면역반응성.
