稳定表达丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶的HepG2细胞克隆的建立
은정표체병형간염병독단련사안산단백매적HepG2세포극륭적건립
Establishment of stably transfected HepG2 cell line expressing HCV scNS4A/NS3 protease
  • 万方数据
    第四军医大学学报 제사군의대학학보
    JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
    2006年 1期 42-45 ,共4页

    雷迎峰%尹文%薛小平%杨敬%吕欣%韦三华%胡兴斌%孙梦宁%徐志凯

    뢰영봉%윤문%설소평%양경%려흔%위삼화%호흥빈%손몽저%서지개

    丙型肝炎病毒%单链丝氨酸蛋白酶%转染,脂质体法%细胞克隆 丙型肝炎病毒%單鏈絲氨痠蛋白酶%轉染,脂質體法%細胞剋隆
    병형간염병독%단련사안산단백매%전염,지질체법%세포극륭
    目的:构建丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶(scNS4A/NS3)的真核表达载体;建立重组质粒稳定转染的HepG2细胞克隆. 方法:根据文献报道设计扩增scNS4A/NS3编码基因的引物,从HCV阳性患者血清中提取病毒RNA,RT-PCR方法扩增出scNS4A/NS3基因片段, BamHⅠ/HindⅢ双酶切后连接到经同样酶切的真核表达载体pcDNA3.1(-),转化菌株JM109感受态细胞,获得重组质粒pcDNA3.1(-)～scNS4A/NS3,经酶切鉴定及序列测定. 将阳性重组质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经持续G418压力选择和克隆化获得稳定转染的细胞系,用RT-PCR,IFA,Western-blot证实该稳定细胞系可以表达单链丝氨酸蛋白. 结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-scNS4A/NS3;建立了稳定转染的HepG2细胞克隆,命名为scpHepG2. 结论:获得稳定的scpHepG2细胞克隆可表达单链丝氨酸蛋白,为下一步建立以细胞为基础的评价抗HCV丝氨酸蛋白酶药物系统奠定基础.
    목적:구건병형간염병독단련사안산단백매(scNS4A/NS3)적진핵표체재체;건립중조질립은정전염적HepG2세포극륭. 방법:근거문헌보도설계확증scNS4A/NS3편마기인적인물,종HCV양성환자혈청중제취병독RNA,RT-PCR방법확증출scNS4A/NS3기인편단, BamHⅠ/HindⅢ쌍매절후련접도경동양매절적진핵표체재체pcDNA3.1(-),전화균주JM109감수태세포,획득중조질립pcDNA3.1(-)～scNS4A/NS3,경매절감정급서렬측정. 장양성중조질립용지질체법전염HepG2세포,경지속G418압력선택화극륭화획득은정전염적세포계,용RT-PCR,IFA,Western-blot증실해은정세포계가이표체단련사안산단백. 결과:성공구건료진핵표체재체pcDNA3.1(-)-scNS4A/NS3;건립료은정전염적HepG2세포극륭,명명위scpHepG2. 결론:획득은정적scpHepG2세포극륭가표체단련사안산단백,위하일보건립이세포위기출적평개항HCV사안산단백매약물계통전정기출.
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