南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
11期
1641-1643,1647
,共4页
马树东%罗荣城%丁振华%袁长青%丁雪梅
馬樹東%囉榮城%丁振華%袁長青%丁雪梅
마수동%라영성%정진화%원장청%정설매
Her2/neu基因%载体%基因克隆%重组腺病毒
Her2/neu基因%載體%基因剋隆%重組腺病毒
Her2/neu기인%재체%기인극륭%중조선병독
目的 构建编码Her2/neu膜外第一受体区、全长膜外区、膜外及跨膜区3个蛋白的重组腺病毒真核表达载体,为信号传导和免疫研究建立实验材料.方法 RT-PCR扩增出3个目的片段的cDNA,克隆进pAdTrack-CMV穿梭质粒,在BJ5183细菌内同源重组形成腺病毒质粒,脂质体法转染293细胞后,荧光显微镜观察病毒噬斑形成和绿色荧光蛋白表达,Western blot检测目的蛋白的表达.结果 PCR扩增出了预定大小的目的基因cDNA片段,测序结果和GenBank完全相符.病毒质粒转染293细胞后形成了病毒噬斑,绿色荧光蛋白和目的蛋白均获得表达.目的蛋白的表达量随着病毒感染复数的升高而增加.结论 成功地构建了在真核细胞中表达Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的腺病毒载体,为Her2/neu膜外及跨膜区蛋白的功能研究提供了材料基础.
目的 構建編碼Her2/neu膜外第一受體區、全長膜外區、膜外及跨膜區3箇蛋白的重組腺病毒真覈錶達載體,為信號傳導和免疫研究建立實驗材料.方法 RT-PCR擴增齣3箇目的片段的cDNA,剋隆進pAdTrack-CMV穿梭質粒,在BJ5183細菌內同源重組形成腺病毒質粒,脂質體法轉染293細胞後,熒光顯微鏡觀察病毒噬斑形成和綠色熒光蛋白錶達,Western blot檢測目的蛋白的錶達.結果 PCR擴增齣瞭預定大小的目的基因cDNA片段,測序結果和GenBank完全相符.病毒質粒轉染293細胞後形成瞭病毒噬斑,綠色熒光蛋白和目的蛋白均穫得錶達.目的蛋白的錶達量隨著病毒感染複數的升高而增加.結論 成功地構建瞭在真覈細胞中錶達Her2/neu膜外及跨膜區蛋白的腺病毒載體,為Her2/neu膜外及跨膜區蛋白的功能研究提供瞭材料基礎.
목적 구건편마Her2/neu막외제일수체구、전장막외구、막외급과막구3개단백적중조선병독진핵표체재체,위신호전도화면역연구건립실험재료.방법 RT-PCR확증출3개목적편단적cDNA,극륭진pAdTrack-CMV천사질립,재BJ5183세균내동원중조형성선병독질립,지질체법전염293세포후,형광현미경관찰병독서반형성화록색형광단백표체,Western blot검측목적단백적표체.결과 PCR확증출료예정대소적목적기인cDNA편단,측서결과화GenBank완전상부.병독질립전염293세포후형성료병독서반,록색형광단백화목적단백균획득표체.목적단백적표체량수착병독감염복수적승고이증가.결론 성공지구건료재진핵세포중표체Her2/neu막외급과막구단백적선병독재체,위Her2/neu막외급과막구단백적공능연구제공료재료기출.
