中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
9期
704-710
,共7页
何火聪%刘树滔%潘剑茹%傅蓉%陈菁%陈躬瑞%饶平凡
何火聰%劉樹滔%潘劍茹%傅蓉%陳菁%陳躬瑞%饒平凡
하화총%류수도%반검여%부용%진정%진궁서%요평범
TAT-PTD%跨膜递送%GST-TAT-GFP
TAT-PTD%跨膜遞送%GST-TAT-GFP
TAT-PTD%과막체송%GST-TAT-GFP
为探讨TAT-PTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEX-TAT-GFP表达质粒.在E.coli BL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)-Sepharose-4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC-7721、L-02和BEL-7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TAT-PTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的.
為探討TAT-PTD融閤蛋白的跨膜遞送作用機製,採用DNA重組技術構建pGEX-TAT-GFP錶達質粒.在E.coli BL21錶達GST-TAT-GFP,併用穀胱甘肽(glutathione)-Sepharose-4B親和柱進行純化.GST-TAT-GFP在不同條件下與細胞的作用結果錶明,GST-TAT-GFP能有效進入HeLa、SMMC-7721、L-02和BEL-7402細胞,GST-TAT-GFP在遞送時對時間和濃度有依賴關繫.同時,溫度對GST-TAT-GFP跨膜作用具有明顯的影響,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代謝抑製劑的影響很小,肝素的存在能明顯抑製GST-TAT-GFP跨膜進入細胞的能力,GST-TAT-GFP對細胞活性沒有影響.這些結果說明,TAT-PTD可能是通過與細胞錶麵的硫痠乙酰肝素等受體相結閤介導融閤蛋白跨膜遞送進入細胞的.
위탐토TAT-PTD융합단백적과막체송작용궤제,채용DNA중조기술구건pGEX-TAT-GFP표체질립.재E.coli BL21표체GST-TAT-GFP,병용곡광감태(glutathione)-Sepharose-4B친화주진행순화.GST-TAT-GFP재불동조건하여세포적작용결과표명,GST-TAT-GFP능유효진입HeLa、SMMC-7721、L-02화BEL-7402세포,GST-TAT-GFP재체송시대시간화농도유의뢰관계.동시,온도대GST-TAT-GFP과막작용구유명현적영향,GST-TAT-GFP적과막작용수대사억제제적영향흔소,간소적존재능명현억제GST-TAT-GFP과막진입세포적능력,GST-TAT-GFP대세포활성몰유영향.저사결과설명,TAT-PTD가능시통과여세포표면적류산을선간소등수체상결합개도융합단백과막체송진입세포적.
