哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
3期
243-245,250
,共4页
陈月%岳化葵%邹红岩%方爱萍
陳月%嶽化葵%鄒紅巖%方愛萍
진월%악화규%추홍암%방애평
树突状细胞%单核细胞%细胞因子%CD分子
樹突狀細胞%單覈細胞%細胞因子%CD分子
수돌상세포%단핵세포%세포인자%CD분자
目的 建立在体外从健康成人外周血单核细胞(Mo)诱导培养成熟的树突状细胞(DC)的方法.方法 采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞(PBMC),再以黏附法分离出Mo,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)体外培养12天,并于培养第6天加入重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-α)共同培养,于倒置显微镜下观察细胞的形态,以流式细胞仪检测培养6、9、12天DC表面CD1a、CD83、CD86和MHC-DR的表达水平,用MTT法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力,进行比较分析.结果 Mo经rhGM-CSF + rhIL-4诱导培养6 d后,细胞成簇,表型为CD1a 53.2%、CD83 13.6%、CD86 65.5%、MHC-DR 75.4%;TNF-α诱导后,即培养第9 d,细胞表型为CD1a 62.1%、CD83 73.5%、CD86 92.3%、MHC-DR 98.4%,激发初始T细胞增殖的能力最强.结论 rhGM-CSF + rhIL-4诱导Mo 6 d,可获得大量不成熟的DC,该体系有利于DC扩增;加入TNF-α,培养第9 d,DC成熟度最高,适合于临床免疫治疗.
目的 建立在體外從健康成人外週血單覈細胞(Mo)誘導培養成熟的樹突狀細胞(DC)的方法.方法 採用密度梯度離心法分離健康成人外週血中的單箇覈細胞(PBMC),再以黏附法分離齣Mo,加入重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重組人白細胞介素-4(rhIL-4)體外培養12天,併于培養第6天加入重組人腫瘤壞死因子(rhTNF-α)共同培養,于倒置顯微鏡下觀察細胞的形態,以流式細胞儀檢測培養6、9、12天DC錶麵CD1a、CD83、CD86和MHC-DR的錶達水平,用MTT法測定DC刺激同種異體T細胞增殖的能力,進行比較分析.結果 Mo經rhGM-CSF + rhIL-4誘導培養6 d後,細胞成簇,錶型為CD1a 53.2%、CD83 13.6%、CD86 65.5%、MHC-DR 75.4%;TNF-α誘導後,即培養第9 d,細胞錶型為CD1a 62.1%、CD83 73.5%、CD86 92.3%、MHC-DR 98.4%,激髮初始T細胞增殖的能力最彊.結論 rhGM-CSF + rhIL-4誘導Mo 6 d,可穫得大量不成熟的DC,該體繫有利于DC擴增;加入TNF-α,培養第9 d,DC成熟度最高,適閤于臨床免疫治療.
목적 건립재체외종건강성인외주혈단핵세포(Mo)유도배양성숙적수돌상세포(DC)적방법.방법 채용밀도제도리심법분리건강성인외주혈중적단개핵세포(PBMC),재이점부법분리출Mo,가입중조인립세포-거서세포집락자격인자(rhGM-CSF)화중조인백세포개소-4(rhIL-4)체외배양12천,병우배양제6천가입중조인종류배사인자(rhTNF-α)공동배양,우도치현미경하관찰세포적형태,이류식세포의검측배양6、9、12천DC표면CD1a、CD83、CD86화MHC-DR적표체수평,용MTT법측정DC자격동충이체T세포증식적능력,진행비교분석.결과 Mo경rhGM-CSF + rhIL-4유도배양6 d후,세포성족,표형위CD1a 53.2%、CD83 13.6%、CD86 65.5%、MHC-DR 75.4%;TNF-α유도후,즉배양제9 d,세포표형위CD1a 62.1%、CD83 73.5%、CD86 92.3%、MHC-DR 98.4%,격발초시T세포증식적능력최강.결론 rhGM-CSF + rhIL-4유도Mo 6 d,가획득대량불성숙적DC,해체계유리우DC확증;가입TNF-α,배양제9 d,DC성숙도최고,괄합우림상면역치료.
