CAJ | 학술논문

背景与目的:已有研究表明从人胎盘中提取纯化的人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)对小鼠某些实体肿瘤的生长具有明显的抑制作用.本研究的目的是构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri,并观察其对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用.方法:将合成的小鼠IgG信号肽碱基序列与hRl基因序列连接后,重组到逆转录病毒载体V-pLNCX 上构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri.将PA137细胞用于病毒包装,NIH3T3细胞用于测定病毒滴度.采用RT-PCR和Western blot法检测hRI基因的表达.构建小鼠荷B16黑色素瘤模型,注射V-pLNCX-s-hri,同时用生理盐水、V-pLNCX和V-pLNCX-hri作为对照.用肿瘤组织重和微血管密度来评价V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑素瘤生长的抑制作用.采用ELISA方法测定B16细胞培养上清和小鼠血清中RI含量.结果:V-pLNCX-s-hri对培养的B16细胞的感染效率为38.5%.在感染V-pLNCX-s-hri后的B16细胞中检测到RI mRNA和蛋白的表达.感染后的B16细胞的培养上清中hRl的含量为0.228μg/mL.V-pLNCX-s-hri组小鼠外周血中RI的含量为0.249 μg/mL.明显高于生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组的0.035 μg/mL、0.028 μg/mL和0.169 μg/mL(P值均<0.01).生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组小鼠的瘤组织重分别为(1.90±1.12)g、(1.77±0.21)g和(1.10±0.46)g,显微镜下每10个视野的微血管平均数分别为89±6、87±7和41±8;而V-pLNCX-s-hri组的瘤组织重为(0.82±0.34)g.血管平均数为34±4.V-pLNCX-s-hri组与各对照组相比,其瘤组织重和血管数量的差异都有统计学意义(P值均<0.01).结论:构建的分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri能对B16细胞进行有效的感染,且在感染的B16细胞中分泌性高表达.V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤的生长有明显的抑制作用,且效果优于V-pLNCX-hri.
배경여목적:이유연구표명종인태반중제취순화적인핵당핵산매억제인자(human ribonuclease inhibitor,hRI)대소서모사실체종류적생장구유명현적억제작용.본연구적목적시구건분비성표체재체V-pLNCX-s-hri,병관찰기대소서B16흑색소류생장적억제작용.방법:장합성적소서IgG신호태감기서렬여hRl기인서렬련접후,중조도역전록병독재체V-pLNCX 상구건분비성표체재체V-pLNCX-s-hri.장PA137세포용우병독포장,NIH3T3세포용우측정병독적도.채용RT-PCR화Western blot법검측hRI기인적표체.구건소서하B16흑색소류모형,주사V-pLNCX-s-hri,동시용생리염수、V-pLNCX화V-pLNCX-hri작위대조.용종류조직중화미혈관밀도래평개V-pLNCX-s-hri대소서B16흑소류생장적억제작용.채용ELISA방법측정B16세포배양상청화소서혈청중RI함량.결과:V-pLNCX-s-hri대배양적B16세포적감염효솔위38.5%.재감염V-pLNCX-s-hri후적B16세포중검측도RI mRNA화단백적표체.감염후적B16세포적배양상청중hRl적함량위0.228μg/mL.V-pLNCX-s-hri조소서외주혈중RI적함량위0.249 μg/mL.명현고우생리염수조、V-pLNCX조화V-pLNCX-hri조적0.035 μg/mL、0.028 μg/mL화0.169 μg/mL(P치균<0.01).생리염수조、V-pLNCX조화V-pLNCX-hri조소서적류조직중분별위(1.90±1.12)g、(1.77±0.21)g화(1.10±0.46)g,현미경하매10개시야적미혈관평균수분별위89±6、87±7화41±8;이V-pLNCX-s-hri조적류조직중위(0.82±0.34)g.혈관평균수위34±4.V-pLNCX-s-hri조여각대조조상비,기류조직중화혈관수량적차이도유통계학의의(P치균<0.01).결론:구건적분비성표체재체V-pLNCX-s-hri능대B16세포진행유효적감염,차재감염적B16세포중분비성고표체.V-pLNCX-s-hri대소서B16흑색소류적생장유명현적억제작용,차효과우우V-pLNCX-hri.