CAJ | 학술논문

目的: 分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础.方法: 参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRed CDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体.经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测.结果: 扩增出687 bp的HcRed CDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达.结论: 成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础.
목적: 분별구건휴대HcRed기인적PET28a(+)원핵화PIRES진핵재체,병분별재대장애희균화서수돌상세포계(DC2.4)중표체、감정,위후속기인급단백적전염제공기출.방법: 삼조기인고중HcRed1기인서렬,설계HcRed CDS전장인물,이함유HcRed적질립위모판,통과PCR획득목적기인,병분별련접우PET28a(+)원핵재체화PIRES진핵재체.경PCR、매절감정후,원핵재체전화대장애희균,경IPTG유도표체;진핵재체용지질체전염DC2.4,G418사선출극륭후,응용RT-PCR화류식세포의진행검측.결과: 확증출687 bp적HcRed CDS구서렬,구건료원핵화진핵표체재체PET28a(+)/HcRed화PIRES/HcRed,분별우대장애희균화DC2.4세포계중성공표체.결론: 성공구건HcRed기인적원핵、진핵표체재체,병분별재공정균화세포계중성공표체,위후속기인급융합단백적사선、시종화체내관측전정료기출.